ASPP2调节肝癌细胞上皮间质转化的研究

上皮细胞间质化（EMT）是细胞迁移和运动的重要方式，参与器官纤维化和肿瘤转移等病理过程。ASPP2是一种新发现的肿瘤抑制基因，与p53蛋白结合特异性增强p53 的促凋亡作用。我们前期研究结果显示，DNA甲基化导致肝癌细胞中ASPP2表达降低，与肝癌发生发展密切相关。用RNA干扰抑制ASPP2表达可显著增强肝癌细胞的存活和增殖，以及肝癌细胞的体外侵袭能力。本项研究将从临床标本分析,肝癌细胞增殖、粘附、迁移、侵袭能力检测以及EMT和肿瘤干细胞相关标志检测和细胞生物学研究,以及活体荧光肝癌转移动物模型研究，探讨ASPP2调控EMT的作用及其在抑制肝癌转移中的意义。通过基因芯片分析探讨ASPP2的作用机制和关键作用靶点。利用免疫共沉淀和激酶活性检测等实验，探讨ASPP2与Csk相互作用调节Src激酶活性的作用，及其在调控EMT中的意义。本研究结果将为发展肝癌治疗新策略提供理论基础。

上皮细胞和间充质细胞是多细胞生物最主要的两种细胞类型。其中，上皮细胞以稳定、移动受限为特点，通过细胞/细胞间连接维持组织器官的完整结构；相反，间充质细胞以高度的迁移及侵袭能为特点，为上皮细胞提供支持。 细胞的类型并非稳定不变，而是具有一定的可塑性，上皮细胞间质转化（EMT）及其反过程间质细胞上皮转化（MET）在器官发育、细胞迁移和体细胞重编程中发挥了重要的作用。同时EMT细胞也获得了干细胞样特性，包括自我更新能力和抗凋亡刺激的能力。曾有报道指出，在永生化人类乳腺上皮细胞内诱导EMT，能够引起干细胞标记的表达和增加干性相关的能力。另一方面，干细胞样细胞能够表达EMT标记。这些研究结果说明，EMT和上皮干细胞特性的获得之间存在一个直接的联系。ASPP2最早被发现是一种与p53结合的凋亡促进分子，前期的研究发现ASPP2可以与PAR-3结合调节细胞的极性，我们的研究发现，ASPP2可以在细胞膜与-catenin结合并稳定-catenin/ E-cadherin 复合体，调节细胞EMT和细胞迁移。我们利用ASPP2第三外显子缺失的小鼠模型发现在小鼠的肾脏发育过程中，ASPP2缺失导致ZEB1增强，E-cadherin下降，肾小管上皮细胞发生间质样变化。体外实验显示ASPP2缺失导致OKSM诱导的iPS克隆形成数明显下降。在间充质表型的细胞MCF10A-M3中，过表达ASPP2能够使其恢复上皮表型。ASPP2调控MET的作用是通过其N端区域来实现的。我们通过免疫共沉淀和荧光染色发现，ASPP2通过其N端序列与-catenin结合，稳定-catenin/E-cadherin复合体，抑制-catenin的激活。ASPP2缺失导致-catenin在核内聚集，促进-catenin与ZEB1启动子区的结合以及ZEB1的转录。因此，ASPP2是一种调节细胞连接和EMT-MET转换的重要分子，在细胞迁移和细胞重编程中发挥重要作用。研究论文发表在Nature Cell Biol杂志，并在“科技日报”头版进行了报道。