MicroRNA 9 调控肝癌细胞上皮间质转化机制的研究

在我国肝癌是第三位常见的恶性肿瘤，每年死亡11万。传统治疗方法是手术切除，但是临床80%左右患者因各种原因不能手术，而且术后高复发,高转移,成为肝癌患者治疗中难以解决的问题。恶性肿瘤侵袭和转移的能力与上皮-间质转化（EMT）密切相关，肝癌细胞的EMT调控的信号传导通路可能成为新的个体化治疗的靶点。 Hep11和Hep12是从同一肝癌患者提取的两株分别具有偏向上皮或者间质样细胞性质的原代肿瘤细胞，在前期工作中发现Hep12（间质样细胞）高表达MicroRNA9(Mir9), 在肝癌细胞系中过表达Mir9后Klf17蛋白表达被抑制，荧光素报告酶实验证实Mir9作用于Klf17的3'UTR区，同时肝癌细胞系过表达Mir9或则Klf17被干扰后，肝癌细胞的侵袭和迁移能力增强，在此发现的基础上，本申请项目计划研究mir9调控肝癌EMT的机制，为肝癌预后提供新的生物学标记或者为肝癌患者提供新治疗靶点。

肝癌的高复发,高转移,是肝癌患者治疗中难以解决的问题。如果能够抑制恶性肿瘤的侵袭转移能力，将可能会降低肿瘤的恶性程度，延长患者的生存期，因此抑制肿瘤的转移和侵袭可能成为肿瘤新的治疗靶点。上皮-间质转化（Epithelial mesenchymal transitions，EMT）是肿瘤侵袭和转移的关键。.Hep11和Hep12是从同一个肝癌患者的原发灶和复发转移灶中分别分离出两株肝癌细胞系。Hep11细胞具有明显的上皮样细胞形态，Hep12细胞则具有显著的间质细胞特征，Hep12和Hep11比较有更强的侵袭转移能力。 我们利用MicroRNA差异芯片分析了Hep12和Hep11的microRNA表达差异，其中有156个microRNA表达有显著差异，其中Hep12的miR-9表达比Hpe11高1000倍。我们在肝癌细胞系中过表达miR-9，发现miR-9过表达可以促进这些细胞系的迁移和侵袭，同时也可以下调上皮相关基因的表达和上调间质相关基因的表达。microRNA是通过转录后调控发挥作用的， KLF17被microRNA.org预测可能是miR-9的靶基因。荧光素报告酶实验证实了miR-9确实作用于KLF17的3‘UTR区，并抑制KLF17在蛋白水平的表达。KLF17是一个转录因子，我们研究发现KLF17可以直接作用于ZO-1，Vimentin和Fibronectin的启动子区。在36名手术R0切除的肝细胞癌患者中，KLF17在肝癌组织中高表达的患者无病生存期（Disease-Free Survival，DFS）显著高于KLF17低表达的患者。.miR-1246的表达在Hep12也显著高于Hep11，我们进一步研究了miR-1246在肝癌中的功能，发现miR-1246也具有促进肝癌细胞系侵袭和迁移的能力。其作用的靶点是CADM1的3‘UTR区，在肝癌细胞系中下调CADM1可以促进肝癌细胞系的侵袭和迁移。在患者肝癌组织中miR-1246的表达和CADM1的表达负相关。CADM1表达阳性的I期肝癌患者DFS显著高于CADM1阴性的患者。.总之，miR-9通过调控KLF17促进肝癌上皮间质转化，miR-1246通过调控CADM1，从而促进肝癌的侵袭和迁移。miR-9-KLF17和miR-1246-CADM1信号通路可能作为肝癌治疗的靶点。