基于浊毒理论从NALP3炎症体探讨胰岛素抵抗“浊毒损络”病理机制及解毒化浊法的干预作用

Insulin resistance is the central link of type 2 diabetes, but the mechanisms remain elusive. Currently, it is generally accepted that NALP3 inflammasome plays a key role in insulin resistance. According to the theory of Turbid Toxin, Turbid Toxin has close relationship with insulin resistance, and NALP3 inflammasome belongs to Turbid Toxin, insulin resistance caused by NALP3 inflammasome is regarded as the suffering from Turbid Toxin. Our previous clinical studies indicated that Zhuoduqing, a Chinese herbal decoction prepared according to the principle of Clearing Turbid and Dispelling Toxin, was used to treat type 2 diabetes and produced beneficial outcomes, which related to the improvement of insulin resistance. Further study showed that Zhuoduqing performed the activities of anti-inflammation and anti-insulin resistance, implying the close relationship between the improvement of insulin resistance and anti-inflammation by Zhuoduqing. The study aims to explore the pathogenesis of “turbid toxin damaging collaterals”of insulin resistance based on the theory of Turbid Toxin theory and NALP3 inflammasome. Moreover, the study intends to take rosiglitazone as positive control for Zhuoduqing and observe the effects of Zhuoduqing on NALP3 inflammasome in insulin resistant type 2 diabetic rats induced by high-fat diet and low-dose streptozotocin, and to reveal the mechanism of Zhuoduqing in the improvement of insulin resistance and anti-inflammation, which will provide scientific evidence for the application of Clearing Turbid and Dispelling Toxin and Zhuoduqing to resist inflammation and improve insulin resistance.

胰岛素抵抗是2型糖尿病的中心环节，其机制尚未彻底阐明，目前认为NALP3炎症体在胰岛素抵抗中起关键作用。浊毒与胰岛素抵抗密切相关，根据浊毒理论，NALP3炎症体可归属于浊毒范畴，其导致胰岛素抵抗的中医病机是浊毒损络。项目组前期临床研究表明，根据解毒化浊法创制的中药复方浊毒清对2型糖尿病有较好疗效，且疗效与其改善胰岛素抵抗有关。进一步的实验研究表明，浊毒清具有改善胰岛素抵抗和抗炎作用，推测其改善胰岛素抵抗的机制与抗炎作用有关。本项目在前期研究基础上，基于浊毒理论及NALP3炎症体可归属浊毒的认识探讨胰岛素抵抗“浊毒损络”病理机制；且采用高脂饮食+小剂量链脲佐菌素腹腔注射的方法诱导建立胰岛素抵抗2型糖尿病大鼠模型，以罗格列酮为阳性对照，观察浊毒清对该模型大鼠NALP3炎症体的作用，揭示浊毒清改善胰岛素抵抗机制及其抗炎作用及机制，为临床应用解毒化浊法及浊毒清抗炎、改善胰岛素抵抗提供科学依据。

本研究观察解毒化浊中药复方“浊毒清”对2型糖尿病胰岛素抵抗的作用，并基于NALP3 炎症体和TLR-4/NF-κB 信号通路揭示其作用机制。目前研究已顺利完成，项目执行情况如下： .1、在预实验阶段发现高脂饮食+小剂量链脲佐菌素腹腔注射的方法诱导建立胰岛素抵抗2型糖尿病大鼠模型成模率不高，死亡率较高，故改用自发性胰岛素抵抗2型糖尿病小鼠即db/db小鼠进行试验，并选择浊毒清君药佩兰的有效成分香芹酚对db/db小鼠展开了研究。.2、试验的结果：.（1）浊毒清可以降低db/db小鼠葡萄糖耐量曲线下面积、FINS及 HOMA-IR（p<0.05），升高QUICKI（p<0.05）；.（2）浊毒清可以降低db/db小鼠血清中炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18水平（p<0.05）；.（3）浊毒清可以下调db/db小鼠骨骼肌组织中TLR4、NFκB、IκK、IκB、NALP3蛋白及mRNA表达水平（p<0.05）；.（4）组织免疫组化显示：浊毒清减轻db/db小鼠胰腺组织炎症浸润,并下调胰腺组织中TLR4、NFκB、IκK、IκB、NALP3表达水平（p<0.05）；.（5）香芹酚减轻了db/db小鼠血管内皮细胞的损伤，并可降低血清中胰岛素信号分子、TC、TG和炎性细胞因子的表达水平；.（6）香芹酚可降低db/db小鼠血清ALT、AST、BUN、Cre、UA水平，并减轻了肝细胞损伤、改善肝组织胶原纤维增生。. 3、得出的结论：.（1）浊毒清可以改善胰岛素抵抗；.（2）浊毒清可以抑制代谢性炎症；.（3）浊毒清可能通过降低NALP3 炎症体水平，抑制TLR-4/NF-κB信号通路，抑制代谢性炎症反应，从而改善2型糖尿病胰岛素抵抗；.（4）浊毒清可减轻db/db小鼠胰腺组织炎症浸润，改善胰岛细胞形态，可能具有胰岛细胞保护作用；.（5）香芹酚可以减轻2型糖尿病中的内皮功能障碍和血管炎症；.（6）香芹酚可以改善db/db小鼠的肝肾损伤。. 4、指标完成情况：本项目拟发表论文 4 篇，其中国内核心期刊 2 篇，争取发表 SCI 收录论文 1 篇，培养硕士研究生2名。目前已发表论文7篇，其中SCI收录论文2篇，北大中文核心1篇，国内普通期刊4篇，培养硕士研究生2名，培养高级职称1名，获贵州省科学技术进步奖三等奖1项，达到了合同指标的要求。