应用EGS基因沉默技术研究HCMV临床病毒株UL148基因功能

人类巨细胞病毒（HCMV）是先天感染最重要的病原，可导致先天性畸形、智力损害及多系统疾病。与无毒力的实验室病毒株相比，临床低传代病毒株含有一段UL133-UL151的19个开放阅读框（ORFs），其中多个基因已证实与繁殖及致病相关，关于UL148基因功能的研究甚少。本课题组已证实UL148基因存在mRNA水平表达，本项目将应用外部引导序列（EGS）技术沉默UL148基因的表达，检测UL148沉默时HCMV滴度及对病毒极早期、早期和晚期标志基因表达的影响，探讨UL148基因及其表达产物在HCMV复制及致病中的作用。建立特异作用于UL148靶基因的EGS表达系统和抑制病毒感染的模型。试图阐明HCMV UL148基因的基本功能和获得高效沉默该基因产物的EGS技术。此研究将为HCMV基因组功能的阐明提供新的资料，同时为新型的抗病毒药物特别是HCMV的核酸治疗类药物的研究奠定基础。

人类巨细胞病毒（HCMV）是先天感染最重要的病原，可导致先天性畸形、智力损害及多系统疾病。与无毒力的实验室病毒株相比，临床低传代病毒株含有一段UL133-UL151共19个开放阅读框（ORFs），其中多个基因已证实与繁殖及致病相关，关于UL148基因功能的研究甚少。在国家自然科学基金的资助下，本项目成功构建外部引导序列（EGS）、UL148、M1RNA体外转录系统，完成EGS、UL148、M1RNA的体外转录及体外切割反应；构建稳定表达UL148的胞内系统，应用EGS技术沉默UL148基因的表达，检测靶基因表达的抑制情况；并鉴定UL148沉默时HCMV滴度及对病毒极早期、早期和晚期标志基因表达的影响，探讨UL148基因及其表达产物在HCMV复制及致病中的作用。建立特异作用于UL148靶基因的EGS表达系统和抑制病毒感染的模型。该项目已获得高效沉默该基因产物的EGS技术，为HCMV基因组功能的阐明提供新的资料，同时为新型的抗病毒药物特别是HCMV的核酸治疗类药物的研究奠定基础。