EZH2通过ENAH影响上皮间质转化而调控骨髓瘤细胞对蛋白酶体抑制剂化疗敏感性的机制研究

Improving the efficiency of chemotherapy on multiple myeloma (MM) plays a key role in enhancing the overall therapeutic effect and the improvement of the.prognosis of MM patients. Based on the researches worldwide, EZH2 is related to the progression, drug resistance and prognosis . However, the mechanism by which EZH2 influences tumor metastasis and chemosensitization remains unknown. In the previous study, we firstly demonstrated that EZH2 acted high expression in Bortizomib（Btz）resistant MM cell lines cells. In the further study, we showed that the levels of ENAH expression could be activated by EZH2, moreover, we found EZH2 could change EMT type. Thus, we hypothesized that EZH2 could act the resistance of MM cell lines to Btz by directly activating gene expression of ENAH. To identify this scientific hypothesis, we will use MM cell lines to examine the impact of EZH2 activation on the regulation of ENAH and MM cell proliferation, apoptosis, EMT type as well as the sensitization of Btz on the basis of in vitro, in vivo and clinical tissue samples, and demonstrate that EZH2 may augment the resistance of Btz for MM cells through the activation of ENAH.

化疗增敏对于提升多发性骨髓瘤（MM）总体疗效、改善预后具有十分重要的意义。近年来的研究表明，EZH2 作为表观遗传修饰的一个关键酶，与肿瘤的进展、耐药和预后密切相关，该分子对骨髓瘤细胞转移的影响、转移与耐药相互关系的相关报道鲜少。我们前期研究发现，对硼替佐米化疗抵抗的骨髓瘤患者骨髓组织中EZH2分子高表达，该分子能够上调ENAH的表达，改变骨髓瘤细胞的EMT表型。因此，推测EZH2通过ENAH影响EMT表型，从而引发MM对硼替佐米的化疗抵抗。本项目拟从组织学和细胞分子生物学水平, 应用构建的慢病毒表达载体和免疫荧光等技术研究EZH2对MM的EMT表型的影响, 验证EZH2对MM细胞EMT的调控作用并揭示EZH2对MM细胞 EMT表型调控是否通过ENAH或者对靶基因进行直接调控，最终阐明EZH2参与骨髓瘤化疗抵抗的根本原因。

耐药是多发性骨髓瘤（MM）治疗失败导致患者死亡的重要原因之一，EZH2是调控MM耐药的关键基因之一，但具体机制仍不明确。我们前期研究发现：过表达EZH2促进MM对蛋白酶体抑制剂的耐药性，靶向EZH2小分子化合物GSK126能有效逆转MM细胞耐药，且前期机制研究提示，EZH2受泛素化修饰的调控且EZH2与转录因子ENAH的存在相互作用。在此研究背景下，我们围绕EZH2的泛素化修饰机制及EZH2-ENAH信号通路研究MM 耐药的具体机制。.重要的研究结果有：（1）通过免液相色谱-质谱/质谱（LC-MS/MS）检测，去泛素化酶（包括USP5、USP7等）可能与EZH2有相互作用。进一步收集了MM细胞（ARP-1）的细胞沉淀，裂解获得蛋白液，通过内源性Co-IP实验证实EZH2和USP7有相互作用；（2）通过GEO网络公共数据库，下载和分析Affymetrix基因芯片检测的正常浆细胞、骨髓瘤患者MM细胞中ENAH mRNA的数据，结果发现ENAH在原代骨髓瘤细胞中高表达；并在临床标本中验证出相比于健康人PBMC，MM患者中ENAH表达水平增高，表明ENAH在骨髓瘤中高表达，并介导骨髓瘤的进展和耐药；（3）过表达EZH2能够明显增强ENAH蛋白表达水平，而mRNA水平改变无统计学意义，通过进一步分析发现EZH2能够通过调控ENAH的泛素化修饰影响其蛋白表达水平；（4）USP7/EZH2/ENAH轴可作为一个潜在的分子靶点共同调节骨髓瘤细胞干性从而介导耐药。这些研究结果为复发、耐药MM 患者的靶向治疗提供新思路，具有潜在临床应用和转化前景。.本项目在基金委的资助下，已发表SCI研究论文1篇，中文核心论文4篇。本课题主要研究内容已经完成，论文目前投稿于Oncogene，处于审稿状态。培养硕士研究生已毕业1名。参加国内学术交流3人次。总之，本项目进展顺利，感谢基金委对于本项目的资助，待有更多成果后，继续汇报。