高致病性禽流感病毒NS1相互作用蛋白的鉴定及功能验证

2009年以来我国多地散发禽流感H5N1感染致死事件引起大家广泛关注，其致病病原-禽流感H5N1病毒的致病机理仍未知。目前研究提示NS1蛋白在病毒致病进程中发挥重要作用，而其发挥作用主要通过与宿主蛋白的相互作用实现。因此，本研究拟选择禽流感病毒研究常用的人Ⅱ型肺上皮细胞-A549为模型，以常用弱毒株PR8病毒作为骨架、拯救NS1基因替换为高致病性禽流感HK/97 NS1基因的重组病毒PR8/HK-NS1，通过2D BN-PAGE鉴定和分析与NS1相关的蛋白复合体；同时，以HK/97 NS1蛋白为诱饵，通过经典免疫共沉淀和pull-down的方法钓取并鉴定NS1相互作用蛋白，两种策略并行以求获得新的NS1相互作用功能蛋白，通过进一步对其相互作用蛋白功能的探索，从而为阐明高致病性禽流感NS1在病毒与宿主相互作用中的作用机制提供新的线索。

流感给人类健康和社会经济造成巨大的危害，但其致病机理仍未知。以往研究发现，流感NS基因在其致病过程中可能发挥了重要的作用。因此，本研究拟以人II-型肺上皮细胞A549为模型，寻找NS蛋白的相互作用蛋白，初步阐明NS基因在流感病毒与宿主相互作用中的机制。对项目取得的成绩做简单概述如下：.1. 重组NS基因新型甲型H1N1流感病毒的检定。我们从临床H1N1/09感染病人咽拭子样本中分离、鉴定到一株甲型流感病毒，其重组了NS（HK/97/483），并对其进行了体内、体外检定。我们扩增了该病毒的全部基因并进行了测序，经序列比对，发现其为一株H1N1流感病毒，重组的NS基因来源自HK/97/483(H5N1)；经体外方法分析了该病毒在不同细胞中的生长曲线；经感染小鼠，分析了该病毒对小鼠的致病。结果发现该病毒可引起小鼠多器官病毒感染，造成小鼠肺细胞因子异常，这与报道的H5N1流感病毒类似。.2. NS对A549细胞凋亡的影响及机理。经对NS相互作用蛋白的数据分析，我们发现有很多凋亡相关蛋白。将NS转染A549细胞后，发现NS诱导了A549细胞的凋亡；对A549细胞的凋亡诱导依赖于对NF-kB信号通路的抑制。