p120ctn调控Kaiso出核影响肺癌细胞周期及增殖的分子机制

p120ctn影响细胞周期的具体机制不清。我们发现体外培养的肺癌细胞系中，Kaiso核/浆的亚细胞定位与细胞周期相关，并受到p120ctn亚型III的调节。已知p120ctn能够与Kaiso结合并具有出核序列，而Kaiso却没有，这提示我们p120ctn可能通过调节Kaiso的亚细胞定位，解除Kaiso对cyclinD1的转录抑制，进而调节细胞周期的进程。为深入验证我们的推论，本项目拟建立干扰、和高表达p120ctn亚型III及p120ctn亚型III入核序列突变的稳转细胞系，并采用来普霉素阻止p120ctn出核等方式，利用流式分选、免疫荧光、核/浆蛋白分离及电泳迁移率试验等方法，验证p120ctn对Kaiso的亚细胞定位及细胞周期的影响，并阐明其具体机制。为p120ctn亚型III影响肺癌细胞增殖、侵袭转移的相关研究提供新的理论补充，也为寻找Kaiso的靶向治疗方法打下实验基础。

已按计划标书完成了所有研究内容，达到了实验目标，发表属该项目基金号的SCI论文5篇，另有1篇在投Lung Cancer。.我们证实p120ctn亚型3能够与Kaiso结合，并调控Kaiso的核浆分布。Kaiso能够与cyclin D1启动子区KBS序列的结合，并下调cyclin D1和cyclin E的表达水平。而p120ctn亚型3上调cyclin E是通过cyclin D1实现的。p120ctn亚型3与Kaiso的结合能够抑制Kaiso与cyclin D1启动子区的结合。我们得出p120ctn能够通过调节Kaiso的亚细胞定位，解除Kaiso对cyclinD1的转录抑制，进而调节细胞周期的进程。.之后我们还对调控细胞增殖和侵袭能力的CRKL进行了研究。我们首先发现CRKL在正常支气管上皮细胞中呈阴性表达,而在肺癌组织中有44.3%（58/131）的病例存在阳性表达，WB检测发现肺癌中CRKL的表达明显高于对应的癌旁正常肺组织, CRKL蛋白在肺腺癌中的阳性表达为60.34%明显高于鳞癌（P=0.001），其表达与肺癌的低分化、高p-TNM分期(P=0.0035)、高Ki-67(P=0.0062)增殖指数和不良预后明显相关（p=0.0183）。在HBE和H1299中转染CRKL基因后，可明显上调CyclinD1和CyclinB蛋白表达，增加Rb的磷酸化，促进肺癌细胞的增殖、克隆形成能力。接着我们发现CRKL能通过激活ERK信号通路而上调MMP9的表达进而促进肺癌细胞的侵袭能力。另外，CRKL在肺癌淋巴结转移灶中阳性率高与原发灶，通过原发灶和对应的淋巴结转移灶对比发现CRKL过表达存在异质性。这些扩展性的研究为再次申报课题打下了很好的基础。