基于内皮细胞紧密连接研究麦冬皂苷对肺肿瘤转移的作用机制

This study focuses on the mechanism of Ophiopogonins on lung tumor metastasis, based on the traditional theory of traditional Chinese medicine on lung cancer metastasis and the usage of Radix Ophiopogonin. This research chooses the endothelial cell tight junction damage activated by tumor necrosis factor, which plays an important role in lung tumor metastasis, as the breakthrough point. The modern molecular biology methods of knockdown, overexpression, resistivity measurement, Western blot, immunofluorescenc, and so on, are used to study the key protein NMMHC II A on endothelial cell tight junction and the role of Ophiopogonins constituents the regulation. The tumor metastasis model in vivo and in vitro was involved to explain the mechanism of Ophiopogonins on tumor metastasis. This study provides a new therapeutic strategy for lung cancer metastasis prevention in early stage, and a new theoretical support for the application of TCMs modernization, and a reference for the further development of innovative TCMs.

本研究从中医关于肺癌转移与中药麦冬的传统用药理论出发，以麦冬皂苷为研究对象，选取与肿瘤转移的病理机制密切相关的病理生理环节-内皮细胞紧密连接破坏-作为切入点，拟采用炎症因子等病理因素活化的肺内皮细胞紧密连接破坏模型，并综合采用基因干扰和过表达、电阻率测定、蛋白印迹、免疫荧光等多种现代分子生物学研究手段方法，通过病理、生理和分子细胞生物学等多种技术方法的互补集成，考察关键蛋白NMMHCⅡA 对内皮细胞紧密连接的作用及麦冬皂苷成分的调节作用；并在体内肿瘤转移模型上加以验证；从体内、体外、分子等多层面探讨中药麦冬皂苷类化合物对肺癌转移的作用及其机制，并从功能蛋白NMMHCⅡA角度阐释麦冬皂苷的作用机制；本研究通过检测在肺肿瘤转移早期发生变化的细胞因子，为肺癌转移早期的防治提供新的治疗策略；同时为传统中药的现代化应用提供理论支持，为进一步研制作用机理明确、具有自主知识产权的创新中药提供参考。

本研究从中医关于肺癌转移与中药麦冬的传统用药理论出发，以麦冬皂苷类化合物为研究对象，选取与肿瘤转移的病理机制密切相关的病理生理环节-内皮细胞紧密连接破坏-作为切入点，采用炎症因子等病理因素活化的肺内皮细胞紧密连接破坏模型，并综合采用基因干扰和过表达、电阻率测定、蛋白印迹、免疫荧光等多种现代分子生物学研究手段方法，通过病理、生理和分子细胞生物学等多种技术方法的互补集成，考察关键蛋白NMMHCⅡA 对内皮细胞紧密连接的作用及麦冬皂苷成分的调节作用；并在体内肿瘤转移模型上加以验证；从体内、体外、分子等多层面探讨中药麦冬皂苷类化合物对肺癌转移的作用及其机制。本研究首先在TNF-α诱导的内皮炎症模型上筛选对内皮通透性具有保护作用的麦冬皂苷类成分，从25个麦冬皂苷及苷元中筛选出两种药效最好的化合物，然后在实验性肺癌转移的裸鼠模型上验证其药效，且通过蛋白激酶PKCδ和Src进一步阐明其作用机制。通过本项目的顺利进行，共培养硕士研究生2名，发表文章5篇，其中SCI文章4篇，申请中国国内专利一份。本研究为进一步创制机制明确且具有自主知识产权的中药有效成分新药奠定基础。本研究通过检测在肺肿瘤转移早期发生变化的细胞因子，为肺癌转移早期的防治提供新的治疗策略；同时为传统中药的现代化应用提供理论支持，为进一步研制作用机理明确、具有自主知识产权的创新中药提供参考依据。