IL-17通过调节NF-κB在病毒性心肌炎中发挥促炎症作用的机理研究

病毒性心肌炎是由病毒引起的心肌局限性或弥漫性炎症，严重者可致扩张型心肌病甚至猝死。其主要发病机制为心肌炎性、免疫反应和自身免疫反应。现已知，IL-17在多种自身免疫反应性疾病如自身免疫性心肌炎中发挥关键的促炎作用,且这种促炎作用是通过NF-κB介导的。我们的前期试验显示，IL-17在科萨奇B3病毒（CVB3）引起的心肌炎中表达显著增加，提示其参与了病毒性心肌炎的炎性反应。我们还发现，NF-κB参与介导了CVB3引起的心肌炎症。所以我们推测，IL-17在CVB3引起的病毒性心肌炎中发挥关键性的促炎作用，且通过NF-κB介导。本课题拟采用多克隆IL-17中和抗体和NF-κB特异性抑制剂（PDTC），在CVB3引起的病毒性心肌炎动物和细胞模型上深入研究IL-17在病毒性心肌炎中的促炎作用及其信号通路。本课题将进一步阐明病毒性心肌炎病理机制,为病毒性心肌炎治疗以及创新药物研究开发打下坚实的实验基础

本项目采用多克隆IL-17抗体、NF-kB特异性抑制剂（PDTC）和洛沙坦，在科萨奇B3病毒（CVB3）引起的病毒性心肌炎动物和细胞模型上，运用分子生物学、影像学等试验技术，从抗病毒、免疫调节等多层面探讨了IL-17在病毒性心肌炎中的作用机理和信号通路。此外，我们根据体内试验中发现Sirtuin-p53信号通路在病毒性心肌炎中的改变和炎症与癌症的关系，增加和拓展了Sirtuin-p53信号通路在肝癌中的作用研究。取得以下结果：. IL-17抗体能抑制CVB3在原代培养的心肌细胞上的复制，显著降低病毒性心肌炎小鼠的死亡率，减轻心肌病理改变，改善心功能和抑制左心室肥大；并能调节多种细胞因子的表达，且能下调Sirtuin蛋白家族成员Sirt1和p53的表达；其作用机理是通过抑制Th1免疫细胞和Th17免疫反应，抑制Sirtuin-p53信号通路，从而实现治疗病毒性心肌炎的综合药效。与PDTC合用的结果表明，其是通过NF-kB信号通路发挥促炎症作用的。洛沙坦对病毒性心肌炎小鼠有明显保护作用，且是通过对IL-17信号通路的调节实现的。本研究结果证实了IL-17在病毒性心肌炎的发病过程中发挥关键性的促炎症作用，且是通过NF-kB发挥促炎症作用。. 我们采用构建质粒的方法表达了病毒5个成熟蛋白，转染大鼠心肌细胞H9C2后发现若干病毒蛋白的表达可以导致TGF-β表达的上升。本研究首次发现单独表达某些病毒蛋白可以和全病毒感染一样诱导心肌细胞表达TGF-β。. Sirtuin蛋白家族有7个成员：Sirt1—Sirt7，具有多种生理功能，涉及转录、细胞周期、凋亡、及基因组稳定调控等。我们在病毒性心肌炎体内模型中发现 Sirtuin-p53信号通路在病毒引起的炎症中发挥作用，而慢性炎症是癌症的重要诱因之一，因此我们增加并拓展了Sirtuin-p53信号通路在肝癌细胞系中的作用研究。结果发现，Sirt3过表达可以显著抑制肝癌细胞系HepG-2细胞和Huh-7细胞的增殖，诱导肝癌细胞凋亡，且显著抑制ERK1/2的磷酸化。这一结果为深入探讨Sirtuin-p53信号通路在炎症诱发癌症中的作用，以及寻找新的治疗靶点提供了实验基础。. 本项目的研究结果已发表相关研究论文4篇(SCI论文2篇)，另有1篇SCI论文在修回中，培养研究生2名，完成了本项目的研究目标和考核指标。