番鸭呼肠孤病毒p10.8蛋白核质转运分子机理研究

番鸭呼肠孤病毒病是主要危害雏番鸭的高发病率、高致死率的新发传染病。我们前期对番鸭呼肠孤病毒p10.8蛋白的凋亡功能研究（Geng et al., 2009）过程中发现，该蛋白具有由细胞核向细胞质转运的功能。为了明确p10.8蛋白是否具有核定位和核输出信号，阐明其由细胞核向细胞质转运的分子机理，本项目拟以S14毒株的p10.8编码基因为研究对象，通过基因缺失、突变、共聚焦免疫荧光等分子生物学实验技术，在整体、动态和网络的水平上阐明p10.8蛋白亚细胞定位功能分子机理。对p10.8蛋白亚细胞定位功能分子机理的研究，可以为病毒与宿主细胞的相互作用以及病毒的致病机理的研究奠定基础。

番鸭呼肠孤病毒病是主要危害雏番鸭的高发病率、高致死率的发传染病。前期对番鸭呼肠孤病毒p10.8蛋白的凋亡功能研究过程中发现，该蛋白具有由细胞核向细胞质转运的功能。本研究明确了p10.8蛋白具有核定位和核输出信号，并阐明其由细胞核向细胞质转运的分子机理。番鸭呼肠孤病毒p10.8蛋白氨基酸序列与其他任何蛋白没有相似性，因此，它的氨基酸所提供的序列对于其功能不能提供任何的线索。研究发现p10.8蛋白在病毒感染或pCDNAp10.8载体转染的初期（6小时之内）都定位在细胞核中，表明p10.8蛋白的核定位功能与病毒的感染或其他呼肠孤病毒蛋白无关。通过对p10.8蛋白一系列突变体载体进行细胞转染后观察，发现p10.8的核定位功能位于该蛋白的N-末端的1-40个氨基酸区域内，该区域的氨基酸序列与传统的核定位信号没有任何相似性，因此，我们称之为非传统核定位信号。核定位信号（NLS）与细胞浆中的大蛋白连接后，能够携带该蛋白进入细胞核中。因此，p10.8进入细胞核的分子机理是由一个非传统的核定位信号引领进入。核输出信号大多含有富含亮氨酸的基序。 pCDNAp10.8载体转染9小时之后，荧光检测发现其定位在细胞质中，通过LMB的作用，研究表明p10.8d的核输出是主动运输。对p10.8的序列分析发现其含有富含亮氨酸的基序：33LSVLAELSDLFDLAI47，符合核输出信号要求的序列，通过对缺失或突变质粒转染细胞证明，33LSVLAELSDLFDLAI47是一个核输出信号，p10.8蛋白的核输出是CRM1依赖的途径, 亮氨酸在此核输出信号中是关键氨基酸。目前已发表4篇SCI文章，中文核心期刊4篇，获得国家发明专利2项，培养研究生3名。