从VEGFA/KDR通路研究清热化瘀法治疗子宫内膜异位症的分子机制

Angiogenesis is the necessary phase in endometriosis caused by endometrial ectopic growth. Clearing heat and removing blood stasis can inhibit the hyperplasia of ectopic endometrium tissue, causing them to atrophy, but the specific mechanism is unclear. Our previous study showed that the expression of VEGFA and its receptor KDR in ectopic endometrium was obviously decreased in the process of clearing heat and removing blood stasis treatment for EMs, and angiogenesis was restrained. Accordingly, we put forward the hypothesis that clearing heat and removing blood stasis treated EMs may be through VEGFA/KDR signaling pathway that affect PTGS2 activity, reduce the secretion of PGE2 in macrophages, and then decline the estrogen secretion in ectopic endometrium, thereby inhibit angiogenesis and prevent the growth of ectopic endometrium. We will use conventional techniques of molecular biology and chips to study the mechanism of clearing heat and removing blood stasis to regulate VEGFA/KDR signaling pathway and to inhibit angiogenesis in ectopic endometrium in the EMs rat models. We will select biomarkers in the signaling pathway to monitor the change of the pathway before and after treatment on clinical patients, in order to explore the mechanism of clearing heat and removing blood stasis treated EMs, looking for the drug targets, and screening the new biomarkers can be applied to clinical diagnosis and treatment.

血管新生是子宫内膜异位生长导致子宫内膜异位症的必经阶段。清热化瘀法能够抑制异位内膜组织增生，导致其萎缩，但具体作用机制不清。我们的前期工作发现清热化瘀法治疗EMs的过程伴随VEGFA及其受体KDR在异位内膜中表达显著降低，血管新生受到抑制。据此我们提出假说，清热化瘀法治疗EMs可能是通过VEGFA/KDR信号通路影响PTGS2活性，下调巨噬细胞PGE2的分泌，进而下调异位内膜雌激素的分泌，抑制血管新生而阻止异位内膜生长。我们采用常规分子生物学方法与芯片技术结合的方案，研究清热化瘀法调控VEGFA/KDR信号通路，抑制大鼠EMs模型异位内膜组织血管新生的机制，筛选其信号通路中的生物标志物，用于监测临床患者治疗前后该通路的变化，以便探索清热化瘀法治疗EMs的作用机制，寻找药物的作用靶点，并筛选可应用于临床诊断与治疗的新指标。

血管新生是子宫内膜异位症（EMs）发生发展的必经阶段。清热化瘀法能够抑制异位内膜组织增生，导致其萎缩，但具体作用机制不清。我们提出假说，清热化瘀法治疗EMs可能是通过VEGFA/KDR信号通路影响PTGS2活性，下调巨噬细胞PGE2的分泌，进而下调异位内膜雌激素的分泌，抑制血管新生从而阻止异位内膜生长。实验研究结果显示：（1）清热化瘀法对EMs大鼠异位内膜体积和腹腔内微环境有治疗作用，能够下调血清中E2和CA125水平，降低腹腔液中炎症因子和PGE2水平，下调异位内膜中PTGS2和VEGFR2表达，改善腹腔内炎性微环境程度，调节VEGF/VEGFR2信号通路水平，从而抑制血管生成，显著抑制EMs大鼠异位内膜体积的生长，促进异位内膜萎缩。（2）塞来昔布和阿帕替尼作为靶向抑制剂对EMs均有抑制作用，塞来昔布能够明显抑制大鼠腹腔内炎性微环境程度，降低由炎症因子和局部炎症反应引起的血管生成，但对异位内膜体积的抑制作用较弱；阿帕替尼通过靶向抑制血管生成能明显抑制大鼠异位内膜生长，但对腹腔内炎性微环境的调节作用较弱；两种抑制剂的治疗作用均有一定局限性，中药与抑制剂相结合能够发挥更好的治疗效果。（3）清热化瘀法对大鼠EMs的治疗作用涉及大量基因表达变化，除了关注的炎症和血管生成有关基因以外，还包括细胞凋亡、增殖和迁移等过程的有关基因，要确定其中的关键而特异的分子调控途径需要进一步实验数据支持。临床研究结果显示，（1）清热化瘀法可以显著改善EMs患者疼痛症状、中医症状分和生活质量，且疗效优于西药组。（2）血清中VEGF、VEGF-R1、VEGF-R2的含量在一定程度上反映EMs的发生及发展进程，初步为EMs的临床诊断参考与疗效评价指标提供依据。（3）VEGF基因SNP类型-460C/T、+405G/C、-2578A/C不构成妇女EMs易患性关键因素，但作为复杂因素之一，需要结合中医证型分析，作为EMs的临床诊断和疗效评价参考指标。