基于Wnt/β-catenin信号通路活血化瘀法对子宫内膜异位症子宫内膜干细胞作用机制的研究

Endometriosis ( EMS ) in the treatment and prevention of recurrence is completely difficult clinical problem, and its development process is a mystery. EMS is a kind of SC disease, understanding the development of EMS to a new level. This study intends to activators and inhibitors intervention by observing the Wnt expression of SP cells of uterine endometrium, -cateninβand its downstream target gene VEGF and MMP-7mRNA, genesis of SP cells by EMS through Wnt signal pathway. Expression of GSK-3 βsimulation flat, activation of Wnt signaling pathway, detection of the expression of SP cell GSK-3 beta and beta -catenin protein, Wnt signal pathway play a role in the pathogenesis of EMS. Through the observation of FTN on the proliferation of SP cells, in vivo tumorigenesis ability of activating blood circulation to remove blood stasis, clarify with endometrial stem cells to treat feature as the target point target. By detecting the FTN on β-catenin, VEGF, MMP-7 mRNA expression, the effect of expression of Wnt protein, GSK-3 protein, clarify the mechanism of action and the target of promoting blood circulation and removing blood stasis for the treatment of EMS, provide a breakthrough for the treatment of EMS.

子宫内膜异位症（EMS）的彻底治疗及预防复发是临床上的棘手问题，而其发生发展过程仍是未解之谜。EMS是一种SC疾病，将EMS发生发展的认识提到了一个新高度。本研究拟通过观察Wnt激活剂和抑制剂干预后，子宫内膜SP细胞β-catenin及下游靶基因VEGF和MMP-7mRNA的表达，阐明SP细胞通过Wnt信号通路介导EMS的发生。降调GSK-3β的表达，模拟激活Wnt信号通路，检测SP细胞GSK-3β和β-catenin的蛋白表达，证明Wnt信号通路在EMS发病过程中发挥调控作用。通过观察妇痛宁对SP细胞增殖、体内成瘤能力的影响结果，阐明活血化瘀法具有以子宫内膜干细胞为靶点的靶向治疗特征。 通过检测妇痛宁对β-catenin、VEGF、MMP-7 mRNA表达，Wnt蛋白、GSK-3β蛋白表达的影响，阐明活血化瘀法治疗EMS的作用机制及作用靶点，为EMS治疗提供新的突破点。

子宫内膜异位症（EMS）是妇科常见病、多发病，在育龄妇女中发病率达10%-15%，有明显上升趋势。80% EMS患者伴有盆腔疼痛，50%合并不孕。EMS是一种良性疾病，但却具有广泛种植、浸润、转移和复发的恶性生物学特性，治愈率低，复发率高达50%以上，严重影响中青年妇女健康和生活质量。EMS的发生发展过程仍是未解之谜。随着干细胞研究的不断深入，以干细胞为靶点的治疗，将为战胜这一顽疾提供新的方法。本课题开展了以下研究工作：①从EMS在位内膜分离培养获得了子宫内膜干细胞，证明EMS存在子宫内膜干细胞；②EMS子宫内膜干细胞存在Wnt信号通路标志性蛋白β-catenin的表达，分别加入Wnt信号通路激活剂、抑制剂及沉默Wnt信号通路关键酶糖原合成激酶-3β（GSK-3β）后，Wnt信号通路下游靶基因基质金属蛋白酶（MMP-7）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达发生相应改变，证明子宫内膜干细胞Wnt信号通路参与了子宫内膜的粘附、侵袭和血管生成，在EMS的发生、发展中发挥作用；③通过一系列体内外实验发现活血化瘀治法代表方药妇痛宁能够抑制子宫内膜干细胞增殖、克隆形成以及体内成瘤，证明活血化瘀法治疗EMS具有以子宫内膜干细胞为靶点的靶向治疗特征；④妇痛宁通过活化Wnt信号通路关键酶GSK-3β，促进β-catenin的磷酸化降解，进而阻断Wnt信号通路，降低在位子宫内膜MMP-7和VEGF的表达，达到抑制在位内膜的异位生长的作用。本研究结果为妇痛宁颗粒的进一步研发提供了科学的实验研究数据，探讨了中医药治疗子宫内膜异位症作用机制和作用靶点研究的模式，在此基础上可进一步探讨临床确有疗效的不同组方活血化瘀中药的作用机制，有助于促进中医药治疗子宫内膜异位症临床应用和推广，推动中医药基础研究的进展，不断攻克子宫内膜异位症治疗难题。