从PMN的功能调节探讨CGA抗菌多肽对脓毒血症中MODS的作用机制

MODS是脓毒血症主要死因，PMN的功能异常在脓毒血症相关MODS的发生中起到关键作用。申请人首次发现脓毒血症患者肾上腺髓质的重要应激激素蛋白嗜铬粒蛋白A（CGA）的血浆水平升高且与预后相关；CGA衍生的抗菌多肽CHR 和 CAT能诱发PMN的钙内流和脱颗粒，有促炎症反应作用。鉴于CGA和脓毒血症预后相关的机制尚不清楚，我们提出脓毒血症中升高的CGA多肽通过调节PMN功能参与MODS发病机制的假设。拟离体条件下采用免疫组化、流式细胞仪、RT-PCR等方法探讨CHR和CAT对PMN黏附、凋亡和PAF表达的影响；在体条件下，在脓毒血症小鼠模型中，使用CHR和CAT单克隆抗体、去除外周血PMN、荧光显微镜活体微循环和器官组织病理观察等技术，验证CHR和CAT通过调节PMN功能损伤微循环和脏器组织。本研究可能发现脓毒血症相关MODS新的神经内分泌发病机制，为脓毒血症的防治研究提供新的靶点和思路。

我们前期研究发现脓毒症患者血浆嗜铬粒蛋白A（Chromogranin A，CGA）水平明显增加，与患者多脏器功能衰竭（MODS）程度相关，并且与患者预后密切相关。但CGA作为神经内分泌免疫调节的关键前激素蛋白，是否参与脓毒症的MODS发病机制还未有研究。因而本项目阐明CGA及其衍生多肽对脓毒症主要炎症细胞PMN的功能以及脓毒症相关MODS的发生机制中的作用。.在课题实验进行中，我们以客观实验结果作为基础，课题分别从基因水平、细胞水平、临床水平探讨CGA对脓毒症中PMN功能和MODS发病机制的影响。主要研究内容和结果为：①探讨CGA衍生多肽CGA344-364（ CST）对PMN表达PAF的影响和初步机制。我们首次发现CST能抑制PMN表达血小板活化因子（PAF），抑制毒胡萝卜素引起的PMN高表达PAF，可能是通过抑制PMN中磷脂酶A2（PLA2）活性起到这一调节作用。本研究首次表明肾上腺髓质激素CGA对炎症反应调节中的负反馈作用，有利于进一步阐明CGA在脓毒症和全身炎症反应中的作用；②探讨脓毒症和重症患者入院时CGA浓度与对预后的评估作用，及其在重症患者炎症反应中的临床意义。本研究首次发现，ICU患者入院时血清CGA水平与患者的肾功能、休克、呼吸衰竭相关，CGA 的血浆浓度与ICU 患者的多种危重病评分显著相关，且可作为早期预测患者疾病严重度的可靠指标及重症患者炎症反应的生物标记物。同时CGA可以作为评价炎症反应对机体造成的脏器损伤程度的生物学指标；③探讨CGA47-66(CHR)对脓毒症患者血管内皮细胞高通透性的影响。我们的研究结果首次表明CGA衍生多肽CHR对脓毒性休克患者血清和TNF-α引起的血管内皮细胞高通透性的抑制作用，我们再次证实肾上腺髓质应激激素对重症患者SIRS的调节作用；④探讨CGA启动子区域-415T/C和-462G/A位点基因多态性与脓毒症和重症患者预后的相关性，我们的研究首次表明，CHGA-415 T/C MAF在死亡组的重症患者中比生存组显著增高，CHGA-415 T/C 突变组患者有更高的30d死亡率，CHGA-415 T/C 多态性是重症患者不良预后的独立危险因素。这一研究结果为预测重症患者预后提供了新的理论依据，从基因层面进一步解释CGA参与脓毒症的发病机制，同时也为重症患者的病理过程中神经内分泌免疫功能的调节提供了潜在的治疗靶点。