TIPE2在脑缺血再灌注损伤中的保护作用及其机制研究

TIPE2是2008年发现的新基因，是炎症反应中重要的抑制因子。脑缺血再灌注损伤的机制十分复杂，但有关TIPE2在脑缺血再灌注损伤中的作用至今尚未见报道。申请者前期研究中首次发现TIPE2在脑缺血再灌注中表达显著升高，提示其在脑缺血再灌注损伤中有非常重要的作用，并发现NADPH氧化酶（NOX）的抑制剂Apocynin可降低TNF-α和TIPE2的表达，表明TIPE2的表达可能与TNF-α和NOX的调节有关。鉴于此，本研究拟通过TIPE2-/-敲基因鼠验证TIPE2在脑缺血再灌注中的保护作用及机制，利用原代培养的小胶质细胞及小胶质细胞系BV-2从正反两方面验证NOX、TNF-α及COUP-TFⅠ等一些关键分子引起TIPE2升高的相互作用机制，并在体内进行验证。本课题将首次揭示TIPE2在脑缺血再灌注损伤中的生物学作用及分子机制，并为疾病的防治筛选新的靶点，具有重要的理论意义和潜在的应用价值。

缺血性脑血管疾病发病机制复杂，近年来研究认为脑缺血再灌注后局部过度的炎症反应是造成脑组织损伤的主要原因。肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2（tumor necrosis factor-α-induced protein 8-like 2，TIPE2/ TNFAIP8L2）属于TNFAIP8家族，表明TIPE2是免疫反应中重要的负调控因子，维持自身免疫稳定，可防止过度炎症反应引起的组织损伤。缺血性脑血管疾病的发病机制复杂，TIPE2在缺血性脑血管疾病中是否发挥作用，国内外尚未见相关报道。本课题应用TIPE2-/-敲基因鼠及体外原代培养的小胶质细胞探索了TIPE2在脑缺血再灌注损伤中的保护作用及其调控机制。结果表明TIPE2-/-敲基因鼠脑缺血再灌注损伤后，与野生型小鼠相比其缺血后梗死面积明显增大，神经学评分升高，Cresyl violet，HE染色损伤加重，直接证实了TIPE2在脑缺血再灌注损伤炎症中发挥重要的保护作用。进一步验证了TIPE2-/-敲基因鼠损伤加重的原因，是由于缺血再灌后炎症细胞的浸润增多，炎症因子的表达升高导致的。应用野生型小鼠进行进一步验证发现，脑缺血后脑组织TIPE2的表达升高，并用免疫荧光的方法证实，脑内的小胶质细胞是表达TIPE2的主要细胞。最后课题对脑缺血再灌注后TIPE2表达升高的调控机制进行了研究，体内外结果显示NADPH 氧化酶在调控TIPE2的表达中发挥重要的作用。本课题首次揭示TIPE2在脑缺血再灌注损伤中的生物学作用及分子机制，并为疾病的防治筛选新的靶点，具有重要的理论意义和潜在的应用价值。