大黄素、黄芩素联合应用对重症急性胰腺炎大鼠脾脏炎症因子分泌及胰腺腺泡细胞钙超载的干预作用及其机制研究

我们既往研究结果显示，大黄素、黄芩素联合应用对重症急性胰腺炎（SAP）具有较好疗效（已申请专利ZL200310105814.3），但是其作用机制尚不完全清楚。业已熟知，腺泡细胞钙超载是SAP发生发展的重要分子事件。相关文献及本课题组既往研究还发现，脾脏可能是SAP时炎症因子的主要来源，对促进SAP的发生发展有重要作用。已有研究证明，大黄素、黄芩素均对机体免疫功能有一定调节作用，同时，二者还可抑制细胞的钙离子内流。因此我们推测：抑制脾脏炎症因子的分泌、减少血中炎症介质的水平、抑制腺泡细胞钙超载可能是该药治疗SAP的重要机制，但尚无文献报道。为此，本项目拟通过细胞和动物实验，观察二者联合应用对血清中胰酶、腺泡细胞钙离子浓度及钙通道相关分子、胰腺及脾脏内炎症因子等的影响，对以上推论进行验证。旨在进一步阐明大黄素、黄芩素治疗SAP的机制，为开发具有我国自主知识产权的药物提供相关的临床前资料。

大黄素、黄芩素是中医治疗重症急性胰腺炎（SAP）代表性方剂“清胰汤”中的两味要药大黄、黄芩的主要有效成分，具有抗炎、调节免疫、抑制细胞钙离子内流等作用。课题组前期已通过实验证实，大黄素、黄芩素联合应用对SAP具有较好疗效（已申请专利ZL200310105814.3），与生长抑素类似物善得定疗效相似。同时还发现脾脏可能是SAP时炎症因子的主要来源，对促进SAP的发生发展有重要作用，并推测抑制脾脏炎症因子的分泌、减少血中炎症介质的水平、抑制腺泡细胞钙超载可能是大黄素、黄芩素治疗SAP的重要机制。在本研究中，我们首先进行了大黄素、黄芩素联合应用治疗SAP的最佳剂量比例研究（权重配方法）及主/次药、交互影响研究（拆方实验法），对课题组前期申请专利药物的剂量进行再次验证，以保障本项目大量动物实验结果的准确。为进一步明确其具体作用机制，我们制备大鼠SAP模型，检测大黄素、黄芩素联合作用后对SAP病情的改善作用。结果显示，大黄素、黄芩素联合应用可通过减少胰腺α-淀粉酶分泌，减轻血中炎症因子TNF-a、IL-6水平，减少脾脏炎症因子TNF-a、IL-6表达，从而改善胰腺病理学损伤，缓解重症急性胰腺炎病情。通过分离纯化正常大鼠胰腺腺泡细胞，诱导胰腺炎细胞模型，检测大黄素、黄芩素联合作用后细胞活力、超微结构、细胞内钙离子浓度、细胞钙离子通道蛋白三磷酸肌醇受体（IP3R）mRNA、蛋白水平变化。结果显示，大黄素、黄芩素联合应用对正常胰腺腺泡细胞无损伤作用，可通过增加细胞活力、减轻细胞超微结构损伤、减少细胞3型IP3R mRNA表达，降低细胞IP3R蛋白表达，从而降低细胞钙离子浓度，减轻牛磺胆酸钠引发的细胞钙超载，从细胞水平阐明大黄素、黄芩素联合应用对SAP的治疗作用。因此，大黄素、黄芩素联合应用通过抑制脾脏炎症因子的分泌、减少血中炎症介质的水平、抑制腺泡细胞钙超载是大黄素、黄芩素治疗SAP的重要机制，这一发现阐明了该药的作用机制，为开发具有我国自主知识产权的治疗急性胰腺炎的药物提供可靠的临床前资料。