利用γδT细胞进行恶性肿瘤过继免疫治疗的机理研究

γδT细胞有以MHC非限制性方式直接识别多种肿瘤相关抗原，广谱杀瘤、兼具NK、CTL和Th细胞的功能表现的特点，是肿瘤免疫治疗中是一种具有优势的候选细胞。虽然采用γδ T细胞的过继免疫疗法在动物实验甚至现有的几个临床试验中取得了不错的治疗效果，但输入体内的γδ T细胞的组织（特别是在肿瘤组织内）分布以及相关作用机理尚未有报道。本研究首先分析肿瘤患者γδT细胞趋化因子受体的表达情况，以了解γδT细胞在组织中趋化动力学的结构基础；其次采用肿瘤细胞系系统和来自肿瘤患者的原代肿瘤细胞系统，对肿瘤细胞和组织的相应趋化因子的表达情况和作用，及γδ T细胞识别配体的表达情况进行研究；最后，通过比较不同肿瘤对γδT细胞分布和杀伤作用的影响，及Vδ1和Vδ2两种亚型γδT细胞对肿瘤组织趋化和杀伤的异同，为γδT细胞过继免疫治疗中制剂的优化、治疗方案的制定以及治疗适应症的选择提供理论基础与指导。

γδ T细胞有以MHC非限制性方式直接识别多种肿瘤相关抗原，广谱杀瘤、兼具NK、CTL和Th细胞功能表现的特点，是肿瘤免疫治疗中一种具有优势的候选细胞。虽然采用γδ T细胞的过继免疫疗法在动物实验甚至现有的几个临床试验中取得了不错的治疗效果，但输入体内的γδ T细胞的组织（特别是在肿瘤组织内）分布以及相关作用机理尚未有报道。本研究首先分析了利用anti-TCRγδ抗体法体外扩增的健康人和肿瘤患者γδT细胞趋化因子受体的表达情况，发现扩增细胞高表达CCR5和CXCR3两种趋化因子受体。继而，分析了肿瘤细胞系以及来自肿瘤患者的肿瘤组织相应趋化因子的表达情况，以结直肠癌为研究模型，发现肿瘤组织高表达CCL3、4、5以及CXCL9、10、11，特别是在IFN-γ作用下，这些趋化因子表达进一步增高。体外趋化实验证明结直肠癌细胞分泌的趋化因子对体外扩增培养的γδ T细胞具有明显的趋化作用。随后，本研究比较了Vδ1和Vδ2两种亚型γδ T细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。我们的结果表明Vδ1和Vδ2两种细胞亚型具有相近的杀伤效果，但趋化因子受体表达有所不同。虽然二者均高表达CCR5和CXCR3，但CCL17和CCL22的受体CCR4和CCR8在Vδ1表达量明显高于Vδ2细胞。淋巴瘤组织高表达CCL17和CCL22两种趋化因子，体外实验证明此两种趋化因子对Vδ1细胞具有更强的趋化作用。由于抗体法较传统的磷酸盐体外扩增法能更有效地扩增Vδ1细胞，因此提示抗体扩增法制备的γδT细胞在淋巴瘤过继免疫治疗中具有重要的意义。最后，本研究发现γδT细胞杀伤肿瘤靶细胞主要通过穿孔素-颗粒酶途径，其杀伤途径由TCRγδ识别相应配体启动，由NKG2D受体的激活协同。因此有效激活γδT细胞表面的NKG2D受体将进一步提高γδT细胞的杀伤功能。总之，本研究为γδ T细胞过继免疫治疗中制剂的优化、治疗方案的制定以及治疗适应症的选择提供了一定的理论基础与指导。