αβ TCR基因转染 γδ T细胞过继性免疫治疗骨肉瘤的基础研究

本课题组在体外成功扩增γδ T细胞及分离培养骨肉瘤细胞的基础上，通过细胞杀伤试验发现扩增的γδ T细胞并不一定都能识别骨肉瘤细胞，进而影响其对骨肉瘤的过继性免疫治疗效果。因此，寻找一种对骨肉瘤细胞特异性识别的γδ T细胞是目前亟需解决的关键问题。骨肉瘤在基因和蛋白水平均有黑色素瘤表达，并在骨肉瘤免疫调节中起重要作用。本研究旨在确定特异性识别骨肉瘤表达的黑色素瘤抗原的αβ TCR基因表位，构建αβ TCR基因转染γδT细胞，检测不同来源αβ TCR基因转染γδT细胞对骨肉瘤细胞的杀伤效应；建立SCID小鼠肿瘤种植及αβ TCR基因转染γδT细胞过继免疫治疗模型，阐明其抗骨肉瘤的机制，为骨肉瘤患者的临床免疫辅助治疗提供科学依据。

目前免疫治疗是治疗原发性骨肿瘤的一大热门，尤其是利用固有免疫系统，比如Vγ9Vδ2 T细胞，以免疫过继治疗的手段来杀死肿瘤细胞。在我们先前的研究中，一种含氮双磷酸盐——唑来磷酸，能够使肿瘤细胞对Vγ9Vδ2 T介导的细胞毒性致敏。然而，唑来磷酸致敏的Vγ9Vδ2 T能否渗入骨骼中的肉瘤，是否抑制肿瘤生长，还是未知。因此我们设计了本课题去解决这些问题。我们首先从健康人和软骨肉瘤病人的外周血中通过加入唑来磷酸和IL-2培养Vγ9Vδ2 T细胞。我们分别在体内和体外实验中验证了唑来磷酸预处理的Vγ9Vδ2 T对软骨肉瘤细胞的杀伤作用。同时，唑来磷酸预处理的Vγ9Vδ2 T的迁移能力和肿瘤杀伤能力是跟唑来磷酸的浓度和处理时间成正比的。另外，每周静脉注射唑来磷酸能够抑制裸鼠皮下肿瘤的生长。因此，Vγ9Vδ2 T细胞能够渗入骨肿瘤中并且显著抑制原位移植软骨肉瘤。此外，我们还研究了HER2单抗，曲妥单抗，能否增强Vγ9Vδ2 T对唑来磷酸预处理的骨肉瘤的杀伤作用。我们先用MTS测了加入曲妥单抗之后Vγ9Vδ2 T细胞对骨肉瘤细胞的细胞毒性。并用CD107a检测法评估了Vγ9Vδ2 T细胞中的脱颗粒程度，同时也使用了抑制实验来探究Vγ9Vδ2 T杀伤过程中哪些相关配体起了作用。结果显示，Vγ9Vδ2 T细胞对低HER2表达的HOS细胞基本没有杀伤作用，而对高表达HER2的U2OS细胞，作用明显。同时，曲妥单抗能够增强Vγ9Vδ2 T细胞的杀伤效果。这些结果证明了联合唑来磷酸和曲妥单抗能够有效的增强Vγ9Vδ2 T细胞的杀伤肿瘤潜力。这个结果也让人对将唑来磷酸联合曲妥单抗用于Vγ9Vδ2 T细胞介导的骨肉瘤免疫治疗充满了希望。总之，利用唑来磷酸致敏的Vγ9Vδ2 T细胞杀伤原发性骨肿瘤是很有前景的。