龙胆泻肝汤体内作用物质基础及肝胆湿热证相关性研究

Clarification of the pharmacological material in vivo and mechanism of action have been one of the difficulties for modernization and internationalization of TCM. Although Longdanxiegantang is being widely used to treat disease in liver and gallbladder, the correlation between pharmacological material and hepatochlic hygropyrexia syndrome is still unclear. After oral administration of Longdanxiegantang to rats, the UPLC-Q/ TOF-MS and MSE scan method will be applied to study the components absorbed into the blood and the derivatization method combined with intestinal bacteria and liver microsme metabolism method will be used to study the in vivo metabolism of iridoids which are the main components of longdanxiegantang. The mechanism of action of the formular for disease in liver and gallbladder will also be studied by metabonomic methods. Our research aims for clarification of the correlation between the pharmacoligical material of Longdanxiegantang and hepatochlic hygropyrexia syndrome. The present research will provide scientific basis for preventing and curing disease of Longdanxiegantang, supply references for using medicine safely and effectively, and also help to search for new mode to study the pharmacological material of TCM.

阐明中药方剂的体内作用物质基础及其作用机制成为中药现代化、国际化的瓶颈与难点之一。龙胆泻肝汤在临床被广泛用于利湿清热、清肝利胆，但其体内真正作用物质与肝胆湿热证的相关性还不清楚。本研究利用肠菌代谢、肝微粒体代谢与衍生化等研究方法对龙胆泻肝汤主成分环烯醚萜类化合物的体内代谢物进行分析，应用UPLC-Q/ TOF-MS技术和MSE质谱数据采集模式对全方成分及大鼠口服龙胆泻肝汤后血中移行成分进行分析，从而全面阐明龙胆泻肝汤体内作用物质基础，再结合药物代谢组学研究方法解析其清肝胆、利湿热的作用机制。本研究力图阐明龙胆泻肝汤体内作用物质基础与肝胆湿热证的相关性。对龙胆泻肝汤的研究将为阐明龙胆泻肝汤防病治病提供相关科学依据--保证用药的安全有效奠定科学基础、为其他方剂研究提供重要参考，也为中药药效物质基础研究探索新的模式。

本研究以临床常用中药方剂龙胆泻肝汤为研究对象，对其利湿清热，清肝利胆作用体内药效物质及其作用机制进行了研究。本研究采用高脂高糖加湿热环境的方法建立肝胆湿热证动物模型，并采用代谢组学研究方法鉴定出40个生物标记物、找出这些标记物影响的相关代谢通路，从分子生物学的角度对肝胆湿热证的本质进行了阐释，为基于该证候的中药药效验证及药效物质基础研究提供了数据支撑，也为其他中医证候的科学本质研究提供了重要参考。本研究在成功建立肝胆湿热证动物模型的基础上，客观评价了龙胆泻肝汤的治疗作用，发现龙胆泻肝汤对19个生物标记物具有明显的回调趋势，并分析了其对相关生物标记物及其代谢通路的调节，发现龙胆泻肝汤主要通过调节色氨酸、嘌呤、谷胱甘肽代谢及三羧酸循环等代谢通路治疗肝胆湿热证，从而从系统生物学角度科学证明了龙胆泻肝汤的有效性及其作用机制，在此基础上用LC/MS分析了灌胃龙胆泻肝汤后模型大鼠体内血中移行成分，与空白血清比较后共表征了30个龙胆泻肝汤血中移行成分，采用EIC扫描法鉴定了环烯醚萜类化合物3个含氮代谢物（其中gentiadiol为新结构），结合柱前衍生化方法鉴定了环烯醚萜类化合物的7个二氢异香豆素类等体内代谢物，即，采用各种方法和手段，共鉴定40个入血成分。最后，将肝胆湿热证生物标记物与入血成分相关联，发现少部分原型成分及主要的环烯醚萜类化合物体内代谢物为重要的潜在药效物质基础。由于环烯醚萜类化合物特殊的缩醛结构，导致其体内代谢研究极少，而目前大多数研究只是关注原型化合物，本研究首次解析了环烯醚萜体内代谢物为龙胆泻肝汤重要药效物质。本研究为中药方剂的有效性阐释提供了新的方法与思路，也为中药药效物质基础研究提供了新的研发模式。本研究结果为龙胆泻肝汤的质量标记物及相应的质量标准制定、以活性代谢物为基础的单体及组分新药研发及龙胆泻肝汤方剂的二次开发等均提供了广阔的应用前景。