中国人群SHBG基因及其多态性在妊娠期糖尿病发生发展中的分子机制研究

Gestational diabetes mellitus (GDM) refers to abnormal glucose metabolism during pregnancy for the first time the occurrence or discovery, in recent years, the incidence was significantly higher trend. In recent years, studies have shown that sex hormone-binding globulin (SHBG) gene polymorphism and polymorphism can affect SHBG levels and the type of expression of human disease. At present about SHBG gene polymorphism in the pathogenesis and development of GDM research is less. This study selected cAMP-PKA signaling pathway，the SHBG gene Asp327Asn polymorphic loci and (TAAAA)n repeat polymorphism,through ELISA, RT-PCR, Western-blot and genomics testing and other biological technology method, clear and SHBG gene polymorphism and expression level and the relationship between insulin resistance, which is helpful to understand the pathogenesis of GDM and progress, and to find a predict the onset and development of more sensitive method, blocking the pathogenesis of GDM and development, improve the perinatal prognosis, and promote the development of maternal and child health.

妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus, GDM）是指妊娠期首次发生或发现的糖代谢异常，近年发病率有明显增高的趋势。近年来研究表明性激素结合球蛋白（sex hormone-binding globulin, SHBG）基因具有多态性，其多态性可以影响SHBG的水平和人类疾病表达的类型。目前关于SHBG基因多态性在GDM发病与发展方面的研究尚少。本研究通过对cAMP-PKA信号通路、SHBG基因Asp327Asn位点及(TAAAA)n重复多态性研究，采用ELISA、RT-PCR、Western-blot和基因组学检测等生物学技术方法，明确SHBG基因与胰岛素抵抗之间的相互关系，有助于了解GDM的发病机理及病情进展情况，并找到一个预示其发病及发展的较为灵敏的方法，阻断GDM的发病和发展，改善围产期预后，促进母婴健康的发展。

研究背景：妊娠期糖尿病是指妊娠前糖代谢正常或有潜在糖耐量减退，妊娠期才出现或发现的糖尿病。发病率高，对母儿有诸多不良影响。胰岛素抵抗及胰岛素代偿性分泌不足是目前公认的病因。性激素结合球蛋白是与胰岛素抵抗相关的一组糖蛋白，可作为判断胰岛素抵抗和预测2型糖尿病发生的独立因素，其水平的升高能有效地阻止空腹血糖调节受损、2型糖尿病及高胰岛素血症的发生。.研究目的：检测健康孕妇及妊娠期糖尿病孕妇胎盘组织及外周血性激素结合球蛋白单核苷酸多态性Asp327Asn基因频率及基因型分布，及其对胎盘及外周血SHBG蛋白表达的影响，探讨胎盘SHBG D327N在妊娠期糖尿病发生发展中的分子机制；检测健康孕妇及妊娠期糖尿病孕妇胎盘组织及外周血性激素结合球蛋白短串联重复序列（TAAAA）n等位基因频率及基因型，分析其与妊娠期糖尿病的相关性。结果及数据：PCR-RFLP及限制性内切酶酶切法检测对照健康孕妇与GDM孕妇外周血及胎盘SHBG基因Asp327Asn，结果发现，在健康对照组，突变的等位基因Asn327及携带等位基因Asn327的基因型（AA,GA）频率明显高于妊娠期糖尿病组，差异具有统计学意义。通过Western Blot及Elisa对不同基因型胎盘及外周血血清SHBG水平进行检测发现，携带突变等位基因Asn327组胎盘及血清SHBG水平高于野生型Asp327纯合子组（GG）。体外培养HTR8-SVneo细胞系，通过转染重组慢病毒上调SHBG表达，转染120h后，阳性转染组(SHBG-rs6259Asn) SHBG、SHBG mRNA相对表达水平明显高于转染对照组(SHBG-rs6259Asp)、正常细胞组及为空白对照组(LV-5)，差异具有统计学意义（P<0.05）。PCR扩增法及STR二代测序法对对照健康孕妇与GDM孕妇外周血及胎盘SHBG基因（TAAAA）n进行检测，糖尿病组孕妇外周血中等位基因（TAAAA）9 频率明显高于对照组，而等位基因（TAAAA）6的频率明显低于对照组。结论：与长链重复基因型相比，孕妇为短链重复基因型妊娠时患GDM风险可能降低。而Asp327Asn突变型等位基因Asn会通过影响SHBG代谢及活性，使SHBG水平发生变化，进而影响妊娠期糖尿病的发生发展。