补虚化瘀法对雌激素介导的Th1/Th2表达下的原发性胆汁性肝硬化发病机制的研究

Based on the theory of"liver blood""liver controlling dispersion"and our previous clinical studies,We proposed and confirmed that through the method of tonifying deficiency and disspating blood stasis we achieved satisfactory clinical efficacy on PBC patients with syndrome of qi deficiency with blood stasis. Experimental studies were focused on the serum and pathological expression of Th1/Th2 cytokines and estrogen receptors in patients with PBC. And we also have a preliminary screening to the serum by using metabolomics technology to identify the estrogen and immunological differences substance related with the pathogenesis of PBC. This study we will further established metabolites,pathways and receptors which associated with the pathogenesis of PBC by metabolomics technology screening,while using the target cells and liver cells of PBC patients to validate and elaborate the pathogenesis of PBC based on the Th1/Th2 cell imbalance mediated by estrogen. Then adopt the dnTGF-βR Ⅱ transgenic mouse model to observe p38/JNK and other signaling proteins, gene expression and regulation of Th1/Th2, ERα/βthrough the tonic circulation method. Besides we'll combine with PBC patients with peripheral cell culture technology,further elucidate the mechanism of tonifying deficiency and disspating blood stasis in treating PBC patients based on the Th1/Th2 cell imbalance mediated by estrogen.

我们基于"肝主疏泄""肝藏血"理论和长期临床实践，提出并证实补虚化瘀法对气虚血瘀证的PBC患者具有良好的辨治效果，实验研究也对Th1/Th2细胞因子以及ERα/β在PBC血清和病理中的表达进行了初步探讨，并运用代谢组学技术对患者血清进行初步筛查，找出了与PBC发病有关的雌激素和免疫差异物质。本次研究我们将进一步通过代谢组学技术筛选确立与PBC发病关联的代谢物质和通路、受体，同时运用靶细胞和PBC患者的肝脏细胞进行验证，阐述PBC患者基于雌激素介导的Th1/Th2表达异常的发病机制。继而采用dnTGF-βRⅡ转基因小鼠模型，观察补虚化瘀法中药对筛选出的p38/JNK以及其他相关信号蛋白、基因表达的影响和对Th1/Th2、ERα/β调节作用。同时联合PBC患者外周血淋巴细胞培养，采用中药干预进一步阐明补虚化瘀法中药对基于雌激素介导的Th1/Th2表达下PBC的作用机制。

原发性胆汁性胆管炎（primary biliary cholangitis, PBC）是一种隐匿性、慢性进展性以围绝经期女性罹患为常见的自身免疫性疾病，是一类原因尚未明了、意见尚未完全统一的肝脏炎症性疾病，此病的临床症状、病程及病理通常与肝内胆汁淤积的程度有关。熊去氧胆酸(ursodeoxycholic acid, UDCA)是目前被推荐治疗PBC的常规治疗药物，但随着PBC疾病的发病率上升以及接受治疗的PBC患者基数增多，原发性治疗失败以及药物应答不佳者已经接近40%(表现在ALP水平持续异常)，他们的死亡风险仍然高于普通人群，这表明PBC患者需要找出的额外的治疗方案。PBC的发病机制比较复杂，它的发病可能与遗传、生活环境、雌激素水平及免疫功能失调相关。近年来，研究认为雌激素介导的Th1细胞、Th2细胞以及Th1/Th2型细胞因子失调可能是导致PBC发病的重要机制。中医药的辨证治疗补充了西药在PBC治疗上的缺陷，本项目通过前期以代谢组学为基础，找出了雌激素参与PBC发病的理论依据。通过蛋白质组学证实PBC患者存在Th1/Th2型细胞因子失衡，并以人胆管上皮细胞（human intrahepatic billary epithelial cells, HiBEC）为载体建立Th1(IL-1β、IL-6、IFN-γ、TNF-α)、Th2(IL-10、IL-4)型细胞因子失衡的细胞模型。结合免疫组化技术（雌激素受体、Th1及Th2型细胞因子）来探讨PBC的发病机制以及“补虚化瘀”组方中药调控Th1/Th2型细胞因子失衡而治疗PBC的作用环节，为新药开发提供依据。实验研究显示雌激素代谢紊乱以及介导的Th1/Th2型细胞因子失衡是诱发PBC发病的重要因素。而“补虚化瘀”组方中药可降低PBC患者血清IL-6、IFN-γ、IL-8、TNF-α等细胞因子的水平，上调IL-10、IL-4等细胞因子的水平，继而改善Th1/Th2型细胞因子失衡达到降低PBC患者血清ALT、AST、AKP水平，改善肝组织炎症作用，提高UDCA对PBC的应答率。通过HiBEC细胞模型发现“补虚化瘀”组方中药可抑制JNK-MAPK及p38-MAPK的磷酸化来调控Th1/Th2型细胞因子失衡。部分阐明“补虚化瘀”组方中药治疗PBC的物质基础以及作用靶点。总之，通过研究证实运用“补虚化瘀法” 治疗PBC中医治则