基于细胞骨架重塑促进肠上皮细胞AJC组装探讨揉腹法治疗非酒精性脂肪肝病的作用机制

Non alcoholic fatty liver disease is a clinical common disease, Abdominal Tuina as a green therapy has the advantage of stable treatment. The kneading abdominal method as the intervention in this project,and the project group put forward the theory hypothesis that abdomen kneading method produces mechanical force to interference cytoskeleton MLCK signal pathway to remodeling cytoskeleton,to assemble AJC and reduced intestinal permeability. To establish rat model induced by high fat diet.To verify mechanical force on the MLCK and P-MLC mediated.Prove that mechanical stimulation interaction may be the intervention of MLCK and cytoskeleton By.immunofluorescence and immunoprecipitation method to observe the P-MLC and F-actin co location relation and interaction;Detection of F-actin, ZO-1, E- content in order to observe the improvement of cadherin cytoskeleton of intestinal epithelial cells in AJC assembly;Using FITC-Dextran tracer method and the transmission electron microscope observation of intestinal permeability is improved, thus preliminarily reveal mechanism abdominal Tuina method in the treatment of non alcoholic fatty liver disease by regulating the intestinal epithelial barrier permeability.

非酒精性脂肪肝病是临床常见病、多发病，腹部推拿作为绿色疗法具有稳定的治疗优势。本项目以腹部推拿核心手法之一“揉腹法”为干预手段，提出“揉腹法通过机械力干预细胞骨架力学信号通路MLCK，重塑细胞骨架，维持肠上皮细胞AJC组装而改善肠道通透性，从而阻断脂多糖通过肠道侵袭肝脏”的理论假说。拟以高脂饮食诱导建立大鼠模型。观察MLCK及其介导的P-MLC表达，验证手法机械力对其的干预；通过免疫荧光染色和免疫共沉淀法观察P-MLC与F-actin共定位关系和相互作用，证明力学刺激可干预MLCK和细胞骨架的互动；检测F-actin、ZO-1、E-钙粘蛋白含量，以观察F-actin对AJC组装的改善作用；采用FITC-Dextran示踪法和透射电镜观察肠道通透性的改善，初步揭示揉腹法通过调控肠道粘膜通透性而治疗非酒精性脂肪肝病的作用机制。本项目将进一步深化腹部推拿基础研究，为提升应用水平奠定一定基础。

非酒精性脂肪肝病是临床常见病、多发病，腹部推拿作为绿色疗法具有稳定的治疗优势。本项目以腹部推拿核心手法之一“揉腹法”为干预手段，提出“揉腹法通过机械力干预细胞骨架力学信号通路MLCK，重塑细胞骨架，维持肠上皮细胞AJC组装而改善肠道通透性，从而阻断脂多糖通过肠道侵袭肝脏”的理论假说。本项目拟以高脂饮食诱导建立大鼠模型。观察MLCK及其介导的P-MLC表达，验证手法机械力对其的干预；通过免疫荧光染色和免疫共沉淀法观察P-MLC与Factin共定位关系和相互作用，证明力学刺激可干预MLCK和细胞骨架的互动；检测F-actin、ZO-1、E-钙粘蛋白含量，以观察F-actin对AJC组装的改善作用；采用FITC-Dextran示踪法和透射电镜观察肠道通透性的改善，初步揭示揉腹法通过调控肠道粘膜通透性而治疗非酒精性脂肪肝病的作用机制。本项目以高脂饮食成功诱导建立大鼠模型。Western blot方法检测结果证明揉腹法产生的机械力可调控细胞骨架力学信号通路，使其降低MLCK及P-MLC的蛋白表达，为细胞骨架重塑提供基础；利用免疫荧光法观测细胞骨架F-actin与P-MLC的共定位关系，结果表明揉腹法的机械力可干预MLCK和细胞骨架的互动， 从而提高了F-actin、ZO-1、E-钙粘蛋白含量合成，进一步促进了AJC的组装，降低肠道粘膜通透性；利用异硫氰酸荧光素-葡聚糖示踪法检测揉腹法干预后大鼠肠粘膜通透性，研究结果表明肠道粘膜通透性明显降低，且经过电镜观察，肠道细胞结构及线粒体状况显示，揉腹组可明显改善大鼠肠粘膜组织超微结构。上述研究结果确立了假说的成立，初步揭示揉腹法通过调控肠道粘膜通透性而治疗非酒精性脂肪肝病的作用机制。本项目将进一步深化腹部推拿基础研究，为提升应用水平奠定一定基础。