脱细胞神经复合GDNF转染的骨髓间充质干细胞修复面神经大段缺损的相关研究

Facial nerve defect is a difficult problem in oral and maxillofacial and peripheral nerve defect reconstruction ,especially to the facial nerve trunk and branch longer nerve defect .In recent years,many scholars attempted a lot in the repair of facial nerve defect ,But they almost focused on the single branch of facial nerve defect,and the repair effect needs to be improved. Our previous experiments include facial nerve anatomy and defect repair .Based on the existing experiment, we present experimental design：1、Using different acellular methods to treat facial nerve ,select the better acellular treatment method.Using the better acellular method to treat facial nerve, and repair the facial nerve with allogeneic and xenogeneic nerve ,meanwhile monitor the immunologic rejection,to study the feasibility of using acellular xenogeneic nerve to repair facial nerve defect.2、Cultivate and identify mesenchymal stem cells and Schwann cells.To construct gene recombined lentiviral vector that Carrying GFP and GDNF genes,And then transfected into mesenchymal stem cells.3、Repair of rabbit facial nerve trunk and branch defect with acellular nerve implantation of mesenchymal stem cells transfected with GDNF gene,and to detet the effect of repairation.

面神经缺损是颌面部及周围神经缺损修复的难题，特别是对包括面神经主干加各面神经分支的大段缺损修复难度大。近年来众多学者对面神经缺损的修复进行了大量的尝试，但多集中于单支面神经缺损，且修复效果有待提高。 我们前期实验曾就面神经解剖及其缺损修复进行了一系列研究，根据实验基础，我们提出实验设计：1、对面神经采用不同的方法进行脱细胞处理及并对其进行检测，筛选出优化的脱细胞处理方法。采用筛选后的脱细胞方法处理神经，将同种异体及异种脱细胞神经对面神经进行修复，对其引起的免疫排斥进行检测，研究将脱细胞异种神经用于面神经缺损修复的可行性。2、培养、鉴定骨髓间充质干细胞、雪旺细胞。构建出重组的携带EGFP和胶质源性神经营养因子（GDNF）基因的慢病毒载体，并转染间充质干细胞。3、将GDNF基因转染的间充质干细胞植入脱细胞神经，修复兔面神经干加各分支的大段缺损 ，并对修复效果进行检测。

面神经缺损是颌面部及周围神经缺损缺损修复的难题，特别是对包括面神经主干加各面神经分支的大段缺损修复难度大。近年来众多学者对面神经缺损的修复进行了大量的尝试，但多集中于单支面神经缺损，且修复效果有待提高。. 根据实验基础，我们提出试验设计：1、对面神经采用不同的方法进行脱细胞处理及并对其进行检测，筛选出优化的脱细胞处理方法。2、采用慢病毒介导GDNF基因转染间充质干细胞，形成过表达GDNF的间充质干细胞系，将其复合脱细胞神经修复兔面神经2cm多分支缺损，观察其神经修复效果。. 结果：冻融+酶消化法处理的神经未见明显的炎性细胞浸润，冻融+酶消化法处理方法简单、神经支架结构保存完整，神经内髓鞘等抗原成分去除较彻底，是一种良好的去细胞方法，为后期实验提供基础。对面神经总干处神经轴突形态计量学分析发现，术后4周时脱细胞神经移植组其神经轴突计数、髓鞘厚度、髓鞘直径均明显低于其他三组，差异有统计学意义（P<0.05），术后12、24周时检测发现各组间无明显差异（P>0.05）。面神经移植物远端术后12周时面神经各分支检测脱细胞神经移植与MSCs组神经轴突计数、髓鞘厚度、髓鞘直径均明显低于GDNF组与自体神经移植组，差异有统计学意义（P<0.05）。术后24周时脱细胞神经移植各项指标均低于其他三组；术后24周时进行电生理检测，发现自体对照组与GDNF组其神经传导速度优于脱细胞神经移植组与MSCs组，差异有统计学意义.结论及意义：过表达GDNF基因的间充质干细胞可以促进面神经的再生和功能恢复，为临床面神经再生的修复提供新的策略，另外过表达的GDNF可以一定程度上保护面神经元的存活。