恒古骨伤愈合剂对实验性骨质疏松性骨折的治疗作用及其细胞分子机制研究

项目组前期研究发现滇产彝药恒古骨伤愈合剂具有促进骨折愈合，抗实验性股骨头坏死及改善股骨头骨小粱稀疏、减少、断裂等骨质疏松表现，上调坏死股骨头Cbfa1和BMP-2的表达等作用。文献有应用该药治疗骨质疏松症的临床报道。基于此，本研究拟复制去卵巢家兔骨质疏松性骨折模型，从整体水平研究该药对实验性骨质疏松性骨折的治疗作用及其量效与时效关系；以免疫组化、RT-PCR技术研究该药对不同时相点模型兔骨组织Cbfa1、BMP-2、OPG和RANKL基因的蛋白及其mRNA表达的影响，并与①培养的成骨细胞增殖分化和破骨细胞形成与凋亡情况；②血Ca2+、血磷、ALP和TRAP变化；③BMD；④DR；⑤ HRpQCT；⑥生物力学；⑦骨组织形态计量学等检测结果进行比较研究，探索该药治疗骨质疏松性骨折可能的分子机理，为其临床应用提供科学的药理学实验与理论依据，可望产生良好的社会和经济效益，推动云南少数民族药学发展。

本研究分别对恒古骨伤愈合剂治疗与否兔骨质疏松性骨折愈合处不同时相点的BMP-2、Cbfα1、OPG和RANKL的mRNA表达水平进行了研究。证实兔双侧卵巢切除术后 150 d 时能成功建立绝经后骨质疏松症动物模型；结果发现恒古骨伤愈合剂干预双侧卵巢切除兔120 d 可①提高全身BMD和脊柱BMD； ②改善桡骨及腰椎最大载荷（N）、结构刚度（N/mm）、能量吸收能力(N•mm)等生物力学指标； ③改善骨折部位的骨微结构；④Micro-CT可直观地观察骨折愈合情况，如钙化骨痂的重建情况，骨折处骨折间隙的大小以及骨髓腔的通透性；⑤降低骨转换率，明显降低BALP、TRAP5b水平，明显升高血磷含量，但对血钙水平无明显影响；⑥骨折愈合处内源性Cbfa1和BMP-2的mRNA表达上调，而对OPG和RANKL的mRNA表达水平无明显影响； ⑦其含药血清可促进成骨细胞增殖，并增强胞内ALP活性，上调Cbfα1 mRNA水平，但对BMP-2和OPG mRNA水平无明显影响。证实恒古骨伤愈合剂对实验性骨质疏松性骨折兔模型具有治疗作用，并呈现出一定的时效关系，量效关系不明显；提示该药可能通过上调骨组织内Cbfα1和BMP-2的 mRNA表达促进骨形治疗骨质疏松骨折。该研究成果为该药的临床应用提供了实验依据，并为深入研究其药理机制奠定基础。