长链非编码RNA在HPV相关宫颈癌发生过程中的调控功能研究

The incidence of cervical cancer is closely related to HPV infection. However, the specific mechanisms of HPV-associated cervical cancer still lack a comprehensive understanding.The research of Non-coding RNA has further revealed the molecular mechanisms of cervical cancer. Recent studies suggested that long non-coding RNAs (lncRNA) participated in a variety of important signal transduction regulation. In particular, lncRNA plays an important role in the tumor development process. Our previous studies used lncRNA array to screen differentially expressed lncRNA in cervical cancer tissues. On this basis, this project intends to explore the molecular mechanisms of differentially expressed lncRNA in cultured cells, tumor-bearing nude mice model and HPV-associated cervical cancer tissue samples by means of bioinformatics, CHIP, gene cloning and RNA interference techniques.We hope to explore the regulatory mechanism of lncRNA involved in the occurrence and progress of HPV-associated cervical cancer so that we will find a new marker for the diagnosis of cervical cancer and a new drug target for treatment.

宫颈癌的发病主要与HPV感染有关，然而目前对HPV相关宫颈癌发生的具体机制仍缺乏全面了解。近年来非编码RNA在宫颈癌发生过程中的研究已成为热点。尤其是最新研究发现长链非编码RNA（long non-coding RNA lncRNA）能够参与多种重要的信号转导调控过程，在肿瘤的发生发展过程中有着重要的调控功能。而lncRNA在宫颈癌中的调控机制不得而知。我们前期使用lncRNA 芯片筛选得到宫颈癌组织中差异表达的lncRNA，在此基础之上，本课题拟利用生物信息学、CHIP、基因克隆、RNA 干扰等手段在体外培养细胞、荷瘤裸鼠模型及HPV相关的宫颈癌组织标本中研究差异表达lncRNA 参与的分子调控机制，以深入探讨lncRNA 在HPV相关宫颈癌的发生过程中参与的调控机制，为宫颈癌的诊断提供新的候选标志物，并为其治疗提供新的药物作用靶点。

宫颈癌是全球范围内最常见的妇科恶性肿瘤之一，但是，子宫颈癌的发病机制并未完全阐明。近年来研究表明，表观遗传学在肿瘤的发生发展过程中起到非常重要的作用。长链非编码RNA（lncRNA）是目前继微小RNA之后备受关注的又一类非编码RNA。现已知lncRNA 参与基因组印记以及染色质修饰、转录激活、转录后调控、蛋白功能调节等多种重要的信号转导调控过程。通过参与这些调控通路，lncRNA广泛参与包括肿瘤发生发展在内的各种生理病理过程，并且发挥着重要的作用。.为了探讨lncRNA在宫颈癌发生过程中的作用机制，我们利用人基因表达谱芯片分析了人宫颈癌及癌旁组织中的基因表达情况。结果发现宫颈癌与癌旁组织之间存在大量差异表达的lncRNA和mRNA。在芯片结果的基础上，通过生物信息学方法建立了lncRNA/mRNA的共表达网络图谱，发现宫颈癌组织的mRNA与lncRNA的共表达网络结构与癌旁组织具有明显差异，其中PRC2的核心亚基EZH2在宫颈癌组织的共表达网络中是一个具有相对较高中心度的中心节点，同时其在宫颈癌组织中表达量升高。我们最终选取了与其有直接相互作用的lncRNA-TI17313进行了深入的研究，我们将其命名为lncRNA-EBIC（宫颈癌中与EZH2直接结合的lncRNA）。收集大量临床组织标本，通过荧光定量PCR验证发现该分子在宫颈癌组织中较对应癌旁组织中的表达量均升高。进一步的细胞水平实验也显示lncRNA-EBIC在宫颈癌细胞Hela和SiHa中表达量也较原代宫颈上皮细胞显著上升。功能实验发现lncRNA-EBIC能够增强宫颈癌细胞的转移能力。在机制方面，我们发现，该分子可能通过招募EZH2到E-cadherin的启动子区进而调控E-Cadherin表达，从而影响细胞的迁移能力。通过RACE实验获得其全部生物学信息，克隆lncRNA-EBIC并设计、筛选高效、特异的过表达质粒，并转染至宫颈癌细胞系，观察其对宫颈癌细胞增殖、侵袭等功能的影响。.本研究发现表观遗传学调控在宫颈癌的发生发展中发挥着重要的作用，lncRNA是这个调控机制中重要的一个组成部分，我们首次揭示了与宫颈癌相关的差异表达的lncRNA，为寻找抑制甚至阻断宫颈癌侵袭、转移的靶点，探索宫颈癌新的治疗模式提供理论依据。