miR-492影响宫颈癌细胞放化疗敏感性的机制研究

Cervical cancer is a leading cause of cancer death in women worldwide. Platinum based concomitant chemoradiotherapy significantly improved the survival rate of patients with advanced cervical cancer. However, clinical outcomes vary significantly and are difficult to predict. Tumor intrinsic chemoradiotherapy sensitivity is one of the crucial reasons for concomitant chemoradiotherapy failure in cervical cancer. In our previous study, we found miR-492 was significantly down-regulated in resistant group compared with sensitive group (P<0.05). But the underlying mechanism is unclear. The aim of this study is to elucidate the role of miR-492 in regulating chemoradiotherapy sensitivity of cervical cancer cells. We propose to identify its downstream effecor genes and upstream regulatory mechanism. And we will also validate the chemoradiosensitizing effect of miR-492 on cervical cancer cells in vivo. Combined with bioinformatics analysis,we prefer p53/miR-492/EGFR regulatory network as the main content of this study. Our study will provide support for the use of miR-492 as a biomarker to predict chemoradiotherapy sensitivity in cervical cancer.

宫颈癌是女性最常见的妇科恶性肿瘤之一，以顺铂为基础的同步放化疗能明显提高中晚期患者的生存率，但是还有相当数量的病例在治疗后出现局部复发和远处转移。肿瘤内在的放化疗敏感性也是宫颈癌治疗成败的关键因素。申请人前期研究发现miR-492在宫颈癌治疗抗拒组患者中较治疗敏感组患者显著低表达，但具体机制尚不清楚。围绕这一研究结果,本项目将阐明miR-492影响宫颈癌细胞放化疗敏感性的分子机制，确定miR-492增敏的下游效应基因及其所受的上游调控作用；并在动物水平进一步确证miR-492的增敏作用。通过文献阅读、microRNA靶基因预测网站搜寻以及前期预实验的结果，我们初步锁定p53/miR-492/EGFR调控网络为本课题主要研究内容，为miR-492最终成为预测宫颈癌放化疗敏感性标志物提供坚实的理论依据。

宫颈癌是女性最常见的妇科恶性肿瘤之一，以顺铂为基础的同步放化疗被NCI (National Cancer Institute)推荐为IIb期以上宫颈癌患者的治疗标准。然而，肿瘤内在的放化疗敏感性也是宫颈癌治疗成败的关键因素。有研究表明microRNAs (miRNAs)与肿瘤放化疗敏感性密切相关。本研究的目的在于明确miR-492 在宫颈鳞癌中所发挥的作用。前期，我们在104例中晚期 (FIGO IIB-IIIB)宫颈鳞癌患者活检组织中检测miR-492的表达水平，发现其在同步放化疗不敏感组中的表达水平显著低于敏感组患者(p<0.05)。通过Real-time PCR、ChIP和报告基因实验证实miR-492上游受p53蛋白的调控。利用慢病毒载体在宫颈癌细胞系SiHa中高表达miR-492后，发现miR-492可明显促进细胞的增殖、迁移能力以及射线诱导的细胞凋亡。通过蛋白印迹和报告基因实验鉴定出TIMP2是miR-492的功能靶基因之一并对靶位点进行的验证。此外，miR-492的表达水平与宫颈癌患者盆腔淋巴结转移相关(p<0.05)。由于中晚期宫颈癌患者的淋巴结状态是由影像资料判定而非病理诊断，我们还在小样本早期宫颈癌患者手术所切取的盆腔淋巴结样本中检测，发现miR-492在阳性淋巴结中的表达水平远高于阴性淋巴结，进一步提示miR-492在宫颈癌患者盆腔淋巴结转移过程中可能发挥重要作用。此外，统计分析还发现miR-492表达水平与盆腔淋巴结阴性宫颈癌患者的预后相关(p<0.05)，还可用于预测盆腔淋巴结阳性宫颈癌患者的同步放化疗的效果 (AUC of 85%, 特异性75.00% ，敏感性95.24%)，提示miR-492可以作为潜在的标志物来预测中晚期宫颈癌患者的治疗反应和预后。本研究全面系统的阐述了miR-492在宫颈癌中的生物学功能，高表达miR-492可通过促进宫颈癌细胞的增殖来提高其对射线的敏感性，此外还通过miR-492/TIMP2/MMP10通路促进宫颈癌细胞的侵袭转移能力。