FTO调控ERCC1 mRNA去甲基化对宫颈癌放化疗敏感性影响的研究

We found that the expression level of ERCC1mRNA sensitivity associated with cancer chemotherapy.Research reports that mRNA have a methylation modification N6-methyl adenine (m6A). this reversible protein modificates dynamically the positioning and stability of target RNAs by m6A.The study also showed that a m6A FTO demethylase, which changes the state of the mRNA m6A distribution in the cytoplasm. There was no feasibility studies at present.ERCC1mRNA demethylation is regulated by FTO,which affects cancer chemotherapy sensitivity. In this study, using the expression levels of different ERCC1mRNA in human cervical cancer cell line, we further analysis ERCC1mRNA levels and cancer chemotherapy sensitivity relations.After using plasmid and siRNA interference technology, we will change the expression levels of FTO and make the combination of antigen-specific antibody binding and second-generation sequencing technology to detect m6A content and ERCC1 mRNA expression levels.We will investigate FTO regulation mechanisms and analysis FTO level changes to the cells proliferation, migration, apoptosis, and the ability of tumor sensitivity to chemotherapy.

我们发现ERCC1mRNA表达水平与宫颈癌放化疗敏感性相关。最近研究报道mRNA中存在一种甲基化修饰N6-甲基腺嘌呤（m6A），通过m6A蛋白这种可逆性的修饰动态地微调了靶RNAs的定位和稳定。同时研究又表明FTO是一种m6A脱甲基酶，其改变了m6A的mRNA在细胞质中的状态分布。目前，FTO对ERCC1mRNA脱甲基作用是否影响宫颈癌的放化疗敏感性，无研究论证。本研究采用不同ERCC1mRNA表达水平人宫颈癌细胞系，进一步分析ERCC1mRNA水平与宫颈癌放化疗敏感性关系；采用质粒转染及siRNA干扰技术，改变FTO表达水平后，联合应用抗原抗体特异性结合及第二代测序技术检测m6A含量，并检测ERCC1 mRNA表达水平，探讨FTO调控ERCC1 mRNA表达机制；分析FTO水平改变对细胞系增殖、迁移、凋亡、成瘤能力的影响及放化疗敏感性（体内、体外研究）的影响。

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一。其中超过90％的宫颈癌是鳞状细胞癌。放化疗是宫颈鳞状细胞癌治疗方方案中的的主要组成部分。然而，原发性或获得性的放化疗抵抗会导致治疗的失败。因此，我们迫切需要了解宫颈鳞癌中放化疗抵抗的分子机制，并探索克服耐药性的新靶向疗法。我们的前期研究发现，在DNA损伤修复中发挥重要作用的ERCC1，其mRNA表达水平可以预测局部晚期宫颈癌同期放化疗的完全缓解率。同时，我们也发现FTO mRNA在宫颈癌组织中过表达，且其表达水平与宫颈癌放化疗敏感性有关。作为mRNA去甲基化酶，FTO是否通过m6A调控ERCC1 mRNA的甲基化影响宫颈癌放化疗敏感性需要进一步研究。在本研究中，我们发现：在体内及体外实验中FTO的过表达介导了宫颈鳞癌的放化疗抵抗。我们还显示FTO通过mRNA去甲基化上调β-catenin的表达，并激活ERCC1的表达，从而导致放化疗的抵抗。此外，我们的数据也证明了FTO和β-Catenin在宫颈鳞癌患者中的预后价值。这些发现揭示了FTO如何促进放化疗抵抗和宫颈鳞癌预后不良的重要分子机制，为改善宫颈癌放化疗的敏感性，提高宫颈癌治疗的疗效提供理论和实验依据。