糖原合成激酶3beta对宫颈癌样干细胞生物学功能的影响及其分子机制

高危型HPV感染是导致宫颈癌的病因，但仅仅感染HPV并不足以引起细胞的恶性转化，宫颈癌的确切发病机制仍不清楚。我们曾报道糖原合成酶激酶3beta（GSK3β）在抑制上皮细胞增殖及恶性转化中起着关键的作用，近期的研究发现GSK3β在HPV感染宫颈组织中，随病情的不断进展表达量逐渐减少，且GSK3β功能抑制发生于病变的早期，提示HPV可能抑制宫颈干细胞的GSK3β，导致细胞增殖并恶性转化。本项目拟采用免疫组化、基因转染、免疫沉淀、免疫复合物激酶分析、裸鼠致瘤等技术手段，以临床标本及我们近期获得的宫颈癌样干细胞为主要研究对象，通过检测组织中GSK3β信号通路、观察调节GSK3β对宫颈癌样干细胞的影响，系统评价GSK3β与宫颈癌样干细胞发生发展的关系，在体内、体外水平探讨GSK3β对宫颈癌样干细胞生物学功能的影响及分子机制，为阐明宫颈癌发病机制、寻找新的治疗靶点提供具体的理论依据。

宫颈癌是女性生殖系统发病率最高、最常见的恶性肿瘤。其中85%发生在发展中国家。我国每年宫颈癌新发病例超过12万，死亡病例约2-3万。近年来宫颈癌发病率呈上升趋势，并且发病人群趋于年轻化。现已证实，高危型HPV的持续感染，是宫颈癌发生的中心环节。其中E6、E7蛋白是HPV致癌的主要基因。但是，仅仅感染HPV并不足以导致宫颈细胞的恶性转化，HPV感染后E6、E7蛋白表达可引发P53、pRb基因表达及功能异常，促使细胞发生突变，但进一步的具体作用机制仍不清楚。GSK3β具有促癌及抑癌的双重作用。目前国内外对宫颈鳞癌组织中GSK3β的表达及活性报道甚少。宫颈鳞癌组织中HPV16与GSK3β的关系尚无探索。本研究旨在探索HPV16如何调控GSK3β的表达，促进宫颈癌的发生。我们前期的实验分为三个部分，第一部分应用免疫组化方法检测GSK3β、磷酸化GSK3β在宫颈鳞癌组织中的表达及其与HPV16表达的相关性。第二部分构建HPV16 E6重组质粒、E7重组质粒、以及E6/E7重组质粒并鉴定。第三部分首先观察这三种重组质粒对宫颈癌细胞生物学行为的影响。接着观察这三种重组质粒对GSK3β和下游靶基因CyclinD1和β-catenin蛋白表达水平的调控。因此本课题拟通过分析GSK3β的上下游信号调节途径，明确HPV在GSK3β磷酸化调控机制中的作用，进一步筛选出宫颈癌综合治疗的可行性策略。通过实验，我们初步证实：HPV16型 E6、E7通过激活GSK3β蛋白磷酸化发挥对GSK3β下游靶基因CyclinD1、β-catenin基因的调控作用，从而促进了宫颈癌细胞的侵袭、迁移、增殖能力，导致恶性生物学行为的发生。因此探索HPV在宫颈癌发生发展中的作用机制，寻找HPV致瘤信号中新的诊治靶点，将有助于筛选HPV感染人群，科学进行高危人群的分流管理，这对宫颈癌的预防、早期诊断及靶向治疗的探索具有重要意义。. 由于宫颈癌肿瘤干细胞目前缺乏特异性标志物，此部分内容正在实验中。