OX40/OX40L信号对Graves'病患者外周CD4+CD28-OX40+ T细胞的协同刺激作用及其临床意义

OX40/OX40L协同刺激信号在介导T、B等淋巴细胞的免疫应答过程中发挥了重要的调控作用。业已表明，多种自身免疫性疾病与OX40的功能异常密切相关，但其确切机制尚待进一步研究。本项目以自身免疫病患者体内出现的CD4+CD28-自身反应性T细胞和OX40/OX40L协同刺激信号为切入点，以Graves'病为研究对象，利用具有自主知识产权的功能性抗人OX40、OX40L单抗和ELISA试剂盒等，通过免疫组化、FACS、ELISA、免疫细胞功能实验和动物模型等方法，结合患者临床治疗前后该细胞亚群的变化，阐明sOX40L、CD4+CD28-OX40+ T和OX40L+ B细胞三者之间的内在联系及其通过OX40/OX40L信号对自身反应性T细胞的作用及机理，探讨该信号介导的长寿命CD4+CD28-OX40+ T细胞与Graves'病发生发展的相关性，进而为该类疾病的临床干预提供新的思路。

本课题围绕OX40/OX40L共刺激信号开展系列研究，首次检测到4中不同激发方式均能上调正常人T细胞表面OX40和OX40L的表达，两者呈现共表达。同时发现，与正常对照相比，OX40和OX40L在Graves'病（GD）患者外周CD4+ T细胞上均上调表达，且CD4+OX40+OX40L+ T细胞上高表达CD127和CD45RO，表明这群共表达OX40和OX40L的T细胞可能是效应/记忆性T细胞。与临床指标TRAb分析表明，GD患者中高TRAb组外周CD4+ T细胞上OX40、OX40L表达及其共表达水平均高于TRAb正常组，而且当患者治疗后TRAb值恢复正常，其OX40、OX40L及其共表达率也下降；而那些治疗后TRAb值仍维持高水平的患者体内OX40、OX40L及其共表达也保持高水平，这证实OX40/OX40L与TRAb密切相关，可能有助于TRAb的产生，同时，上调表达的OX40/OX40L可能成为辅助诊断GD的一个生物标志以及可靠的预后指标。另外，这对分子在抗CD3单抗激发的GD患者CD4+ T细胞上共表达的强度和持续时间均明显超过正常对照，提示OX40和OX40L在GD患者中的功能可能更强、更持久。T细胞增殖实验也显示GD患者T细胞增殖的强度明显高于正常对照，而阻断OX40/OX40L信号则能显著抑制T细胞增殖，表明无论是正常对照还是GD患者外周CD4+ T细胞上共表达的OX40和OX40L都是有功能的。因此，表达在T细胞上的OX40L可能与这个T细胞或邻近T细胞上表达的OX40相互作用，这样，T细胞可不依赖于APC而形成一个自身扩增的T细胞活化环路。共聚焦显微镜和免疫共沉淀结果显示表达在活化T细胞和Jurkat细胞上的OX40和OX40L形成了功能复合体，从而有助于OX40L信号向OX40传递。因此，OX40/OX40L功能复合体可能发挥更强大的作用促进T细胞增殖，进而有助于GD的发生发展。另外，在GD患者外周血B细胞、单核细胞和NK细胞上也检测到OX40L 的表达，且与TRAb也密切相关。这些研究结果提示OX40/OX40L形成一个复杂的网络，上调表达的OX40/OX40L可能有助于扩增自身反应性T细胞，并维持其长久存活，而持续活化的CD4+ T细胞可能帮助B细胞活化、分泌自身抗体TRAb，从而在GD的免疫病理过程中发挥重要作用。