OX40/OX40L功能复合体在SLE患者CD4+ T细胞上的表达及其放大自身反应的作用机制

OX40/OX40L signal plays an important role in regulating immune response of T lymphocytes. It is traditionally believed that OX40 and OX40L expressed on different immune cells transmit costimulatory signals. However, the coexpression of the receptor and ligand on autoreactive T cells of autoimmune disease patients and its biological significance are still unkown and need to be further investigated. In the project aimed at the critical costimulatory signal OX40/OX40L regulating autoreactive T cells and CD4+ T cells with expression of OX40/OX40L complex for signal transduction, SLE is chosen to explore the changes of CD4+OX40+OX40L+ T cells in different tissues of patients with different disease course. The characteristics of OX40/OX40L and their roles and mechanisms for enhancing autoreactivity of T cells through functional complex or "lipid rafts" were analyzed by immunohistochemistry, FACS, ELISA, animal models, gene chips, coimmunoprecipitation, confocal microscopy, experiments studying function of immune cells, in order to investigate the correlation between the abnormality of OX40/OX40L signal and the development of SLE, and further provide a promising target for clinical treatment of the disease.

OX40/OX40L协同刺激信号在介导T淋巴细胞的免疫应答过程中发挥了重要的调控作用。研究表明，OX40、OX40L分别表达于不同的免疫细胞并介导协同刺激信号，但该受体/配体在自身免疫病患者自身反应性T细胞表面呈现共表达及其生物学意义尚无深入研究。本项目以调控自身反应性T细胞关键正性协同刺激信号OX40/OX40L为主线和共表达OX40L、OX40并形成信号传导复合体的CD4+ T细胞为切入点，以SLE为研究对象，通过免疫组化、FACS、ELISA、基因芯片、免疫共沉淀、共聚焦显微镜、免疫细胞功能实验和动物模型等方法，结合患者不同病程以及不同组织来源CD4+OX40+OX40L+ T细胞亚群的变化，阐明OX40/OX40L在该细胞亚群的表达特性及其通过功能复合体或"脂筏"对放大T细胞自身免疫效应的作用及机理，探讨该信号异常与SLE发生发展的相关性，进而为该类疾病的临床干预提供新的思路。

OX40/OX40L作为一对重要的共刺激分子，为T、B细胞的长效激活提供了重要的第二信号，参与多种自身免疫病的发生发展。本课题系统分析了SLE患者以及狼疮小鼠不同病程阶段免疫细胞上OX40、OX40L及其共表达水平动态变化，结果提示SLE患者和小鼠CD4+ T 细胞上OX40和OX40L表达水平均升高，呈共表达，B细胞和单核细胞等APC以及NK细胞上OX40L水平也上调，且随着病程的进展OX40和OX40L表达也逐渐升高，狼疮肾炎组和活动组OX40 、OX40L及其共表达水平高于非肾炎组和非活动组；治疗后该对分子的表达水平则随病情缓解而下降，这表明OX40/OX40L与SLE疾病的严重程度密切相关。同时，对共表达OX40和OX40L的CD4+ T细胞亚群生物学特性的鉴定表明，这两群细胞的活化程度均明显提高，且CD4+OX40+ T细胞高表达ICOS、PD-1和CXCR5，可能为Tfh细胞。体外功能实验则证明了共表达在CD4+ T细胞上的OX40和OX40L分子是有功能的，能促进T细胞增殖。CD4+ T细胞上表达的OX40L可能与自身或周围T细胞上的OX40结合，使得在淋巴器官、炎症部位、特别是外周循环中的T细胞不依赖于抗原提呈细胞而形成一个自身扩增的T细胞活化环路而放大免疫效应。而且共聚焦显微镜和免疫共沉淀结果表明共表达的OX40和OX40L形成了功能复合体，这可能更有利于信号的传递从而有助于放大免疫效应。这些结果提示OX40/OX40L信号在SLE等自身免疫病的免疫病理中发挥重要的作用，该对分子可能成为治疗自身免疫病的重要靶分子。