OX40/OX40L信号及其介导的CD4+OX40+T细胞活化在支气管哮喘发病机制中的实验研究

Bronchial asthma is a chronic airway inflammatory disease involving many inflammatory cells, inflammatory mediators and cytokines, and the pathogenesis is not completely clear. Many studies showed that the expression of OX40 on CD4+T cells was upregulated, and OX40/OX40L costimulatory signal played a very important role in the pathogenesis of many autoimmune diseases and disorders, but the precise mechanism needed further research. There was little research about CD4+OX40+ T cells in the pathogenesis of bronchial asthma. Our previous study found that the expression of OX40 on CD4+T cells was upregulated, and the concentration of sOX40L was increased in asthma patients. Also the concentration of sOX40L was negatively correlated with pulmonary function indexes in acute asthmatic patients group. We hypothesized that OX40/OX40L costimulatory signal pathway and the CD4+OX40+ T cells mediated by the signal might play an important role in the pathogenesis of asthma. Therefore, through establishing a murine model of acute asthma, and applying the methods of immunohistochemistry, flow cytometry, ELISA, Western Blot, immune cell function assay and animal model to clarify the effects and mechanisms of OX40/OX40L costimulatory signal on the activation of CD4+OX40+ T cells and the interactions with other immune cells, which probe the role of OX40/OX40L costimulatory signal pathway and the CD4+OX40+ T cells mediated by the signal in the pathogenesis of asthma. Through this model we hope for finding some new ideas and targets for the treatment of asthma.

支气管哮喘是一种由T、B淋巴细胞等多种炎症细胞和介质参与的一种慢性气道炎症性疾患，发病机制尚不明确。业已表明，许多疾患中存在CD4+OX40+T细胞的高表达，OX40/OX40L信号在其发病中扮演重要角色，而在哮喘中该方面的研究不多。我们的前期研究发现，哮喘患者外周血存在CD4+OX40+T细胞增多和sOX40L含量的增加，并且和肺功能存在负相关关系。我们推测OX40/OX40L信号及其介导的CD4+OX40+T细胞在哮喘发病中可能具有重要地位。因此，本项目以CD4+OX40+T细胞和OX40/OX40L信号为切入点，通过建立急性哮喘动物模型，运用免疫组化、流式细胞术、ELISA、Western等方法，阐明CD4+OX40+T细胞活化及与其他免疫细胞的相互作用，探讨OX40/OX40L信号通路及其介导的CD4+OX40+T细胞在哮喘发病机制中的作用，以期为哮喘的临床治疗提供新的思路及靶点。

支气管哮喘是一种由T、B淋巴细胞等多种炎症细胞和介质参与的一种慢性气道炎症性疾患，发病机制尚不明确。业已表明，许多疾患中存在CD4+ OX40+ T细胞的高表达，OX40/OX40L信号在其发病中扮演重要角色，而在哮喘中该方面的研究不多。我们推测OX40/OX40L信号及其介导的CD4+ OX40+ T细胞在哮喘发病中可能具有重要地位。因此，本项目以CD4+ OX40+ T细胞和OX40/OX40L信号为切入点，通过建立急性哮喘动物模型，运用免疫组化、流式细胞术、ELISA、Western Blot等方法，阐明CD4+ OX40+ T细胞活化及与其他免疫细胞间的相互作用。同时对哮喘患者气道平滑肌的重构机制，甘草酸在哮喘小鼠中的治疗机制以及哮喘患者药物使用情况等进行了研究，研究结果表明：1）哮喘急性发作患者及哮喘小鼠外周血单个核细胞及肺泡灌洗液细胞存在OX40、OX40L的高表达，CD4+OX40+T细胞亚群的增多；运用OX40单克隆抗体刺激后其分泌和增殖能力增强，肺组织中OX40，OX40L蛋白的表达水平升高。对哮喘小鼠采用阻断型抗OX40L mAb进行干预，以及体内注射OX40+T细胞，结果发现注射OX40+T细胞组小鼠气道嗜酸性粒细胞（EOS）浸润数量明显增多，肺泡灌洗液中的炎症介质明显升高。阻断型抗OX40L mAb组小鼠EOS数量明显减少，炎症介质降低，凋亡T细胞的数量增加，凋亡调控蛋白cleaved caspase-3的表达升高。上述结果提示OX40/OX40L信号通路及其介导的CD4+OX40+T细胞在哮喘发病机制中具有重要作用，为哮喘的临床治疗提供新的思路及靶点。2）甘草酸可以抑制OX40信号诱导的CD4+T细胞的增殖，甘草酸也可以抑制肺组织中的OX40，OX40L和p38MAPK蛋白的表达。结果表明，甘草酸通过抑制OX40/OX40L信号途径发挥治疗效应，为甘草酸治疗哮喘提供了新的理论依据。3）孤核受体可能参与了气道平滑肌损伤后重构等病理过程，具体可能通过cyclin D1途径来参与平滑肌细胞的增殖和凋亡，为其治疗提供了可能的新的干预靶点。4）通过对哮喘患者药物使用的依从性进行干预，提高了哮喘的控制率，降低了患者的经济负担。另外对哮喘合并支气管肺癌患者的临床特点和肿瘤标志物特点进行综合分析，极大提高了该类患者的早期诊断和治疗效果。本项目研究结果对支气