肾小球足细胞UCH-L1异常表达在肾炎发病中的意义

我们前期研究证实，泛素羧基端水解酶－1（UCH-L1）在肾炎组织的足细胞中表达升高；体外足细胞实验也表明UCH-L1表达增强与免疫复合物刺激有关；并证实足细胞有FcγR等受体表达。本课题将继续以体外人足细胞和大鼠Heymann膜性肾病模型为研究对象, 采用转基因、基因干扰和蛋白质分析等方法，检测在免疫复合物作用下，足细胞的FcγR、IgAR和FcRn免疫受体及其相关胞内信号分子的表达，并分析其与UCH-L1表达的相关性，研究免疫复合物上调UCH-L1表达的分子机制；再通过对足细胞UCH-L1与synaptopodin，actin和α-actinin-4表达的检测，及其对RhoA信号分子和α-actinin-4的泛素化调节作用的研究，探索UCH-L1对足细胞骨架蛋白表达和肾小球滤过功能的影响。期望阐明足细胞UCH-L1异常表达在肾炎发病中的意义，为临床防治肾病寻找新的治疗靶点而提供理论基础。

我们前期研究证实，泛素羧基端水解酶－1（UCH-L1）在肾炎组织的足细胞中表达升高；本项目在此基础上，进一步研究足细胞UCH-L1异常表达的调节机制及对足细胞表型的影响作用。在体外实验中，证明了免疫复合物可刺激足细胞的新生儿Fc受体（FcRn）激活，进而引起UCH-L1表达升高。而足细胞的FcRn上调UCH-L1的表达是经MAPK-p38 信号传导途径调控。进一步研究发现，上述激活通路的下游受到NF-kB的调节。应用荧光素酶报告基因实验证实在UCH-L1启动子上有两个特异的NF-κB结合位点。激活或干扰p65可以明显改变UCH-L1的表达，并且在狼疮肾炎活检标本中p65与UCH-L1的表达呈正相关。这些结果很好的阐明了肾炎病变中足细胞UCH-L1上调的重要调控机制。另一方面，进一步研究了UCH-L1、synaptopodin等相关蛋白表达对足细胞生物学表型的影响，并发现足细胞与神经元有许多共同蛋白表达，如NSE、Nestin、NeuN，及这些蛋白对维持足细胞的特殊形态具有重要作用。而且Synaptopodin是通过RhoA通路对足细胞骨架结构进行调控的。体内实验我们在大鼠Heymann 膜性肾炎、大鼠抗Thy1.1系膜增生肾炎模型及大鼠阿霉素肾病模型中，首次应用体内注射外源性的携带有绿色荧光蛋白的逆转录病毒载体MSCV-GFP及BrdU，追踪标记肾病模型中分裂增生的足细胞，证实足细胞损伤后存在增生修复现象。免疫组化则证实人常见肾炎如急性肾小球肾炎、IgA肾病、膜性肾炎、狼疮性肾炎等肾炎组织中，足细胞的PCNA的阳性升高。体外培养足细胞在炎症刺激后也证实细胞周期激酶激活。这是首次在体内实验中显示了足细胞增生的直接证据。从而为足细胞损伤的肾脏疾病的治疗提供了新的突破点。这些工作为深入阐明足细胞UCH-L1在肾炎发病中异常表达的机制及其意义，为临床防治肾病寻找新的治疗靶点而提供理论基础。