中国叶盲蝽族DNA条形码及分子系统学研究(异翅亚目：盲蝽科：叶盲蝽亚科)

Tribe Phylini belongs to the subfamily Phylinae and family Miridae, is the type has many species and distributed broad insect class group. Currently, the systematics research of Phylini mainly adopts traditional morphology research technique, the molecular systematics research rarely has the literature to publish, this sole research way has revealed the limitation day by day. In this research, the application of DNA barcode in the systematics research of Phylini, will confirm the accuracy of beforehand taxonomy,discover the heredity differentiation and the system developmental mechanism in this class group, and provide the powerful support for the inter-species boundary determination. This research will confirm COI as the suitable molecular mark in the systematics research of Phylini, and based on 16SrDNA and Cytb gene fragment, filtrate appropriate DNA barcode for Phylini. At the same time, the research will determine the DNA sequence of species of Phylini from China, construct the system growth evolution, and develop the system growth analysis and the biogeography research. The anticipated findings will obtain the new understanding in the dispute question in the research of Phylini. Simultaneously, this research will certainly to lead and to affect the entire molecular systematics research of Heteroptera, and has the vital significance to the world Heteroptera research.

叶盲蝽族Phylini隶属于盲蝽科Miridae叶盲蝽亚科Phylinae，是种类较多、分布较广的昆虫类群。目前，叶盲蝽族系统学研究主要还是采取传统的形态学研究方法，分子系统学方面的研究鲜有文章发表，这种单一的研究方式已日益显露出局限性。本研究将DNA条形码技术应用于叶盲蝽族的分类研究之中，不仅可以验证以前分类系统的正确性，还可以发现揭示此类群的遗传分化、系统发育规律，为种间界限的确定提供有力支持。研究中，验证COI在叶盲蝽族系统学研究中作为分子标记的适合性，并基于16SrDNA和Cytb基因片段，为叶盲蝽族DNA条形码研究筛选合适的分子标记。同时根据测定的中国叶盲蝽族种类的基因组DNA序列，构建系统发育谱系，开展系统发育分析和生物地理学研究。预期研究成果将使叶盲蝽族分类研究的争议问题获得新的认识，带动和影响整个异翅亚目的分子系统学研究，对世界异翅亚目的研究有着重要意义。

摘要: 基于线粒体CO I、Cytb及16S rDNA的基因序列，探讨其特定区段作为DNA条形码的可行性，并对中国叶盲蝽族Phylini昆虫进行分子系统学研究。采用CTAB法和试剂盒法提取昆虫DNA，设计用于PCR扩增的三个基因非特异性引物，采用Clustal 1.8X、Chromas、Contig-Express和SeqMan生物学软件对测序的序列进行拼接和校对，最后使用Mega 5.0及MrBayes 3.1软件对拼接好的序列进行序列组成分析和系统发育树的构建。本研究共获得中国叶盲蝽族昆虫13属23种共99条序列。三基因片段各自碱基A + T含量明显高于G + C含量，A和T碱基偏嗜，A与T含量几乎相等，与昆虫线粒体基因碱基组成特征相符。遗传距离(P)分析结果显示，基于CO I、16S rDNA基因序列同物种间的遗传距离较低，不同种间的遗传距离较高，能够区分不同物种，而Cytb基因序列则不符合DNA条形码有效性的检验标准。用简约法Maximum Parsimony、距离法Neighbour Joining和贝叶斯法Bayesian重建系统发育关系，基于CO I基因序列构建的系统发育树，同一物种聚为同一支，且分支置信度较高，近缘种能聚集在一起，此段基因序列可作为DNA条形码使用，同时也验证了叶盲蝽族昆虫具有同一个起源祖先，说明了线粒体CO I基因对于叶盲蝽族低级分类阶元的系统发育分析具有一定可行性。基于16S rDNA基因序列构建的系统发育树，同一物种聚为同一支，分支置信度较高，但属级阶元关系较为混乱，因此16S rDNA基因不能很好解决近缘属间的系统发育关系，适合于分析属下阶元的亲缘关系。基于Cytb基因序列构建的系统发育树，种内、种间及属间的系统发育关系均较混乱，因此此段基因序列不能很好地区分物种，也不适合分析叶盲蝽族的系统发育关系。