新型增殖可控性软骨细胞的构建及其在骨性关节炎软骨修复中的作用

随着我国社会老龄化，骨性关节炎(OA)的发生率急剧增加。自体软骨移植是OA病因治疗的手段之一，但因OA患者自身软骨细胞的增殖能力和表型稳定性的严重不足而限制其临床应用。本项目应用细胞核转移、细胞融合和基因转染技术，建立含有SV40LTAG和HSV-TK基因的增殖"永生化"成纤维细胞株，将该成纤维细胞核与软骨细胞融合，经Gancyclovir、G418和Ad-Cre筛选，构建无致瘤性、增殖可控的新型软骨细胞株；利用Tet-off表达系统构建IGFBP-6稳定表达载体并转染新型软骨细胞，研究新型细胞的功能特性以及IGFBP-6对稳定细胞表型的作用；建立兔膝关节OA模型，利用生物支架将新型软骨细胞植入软骨缺损处，明确新型软骨细胞对软骨缺损修复的影响及其相关蛋白的表达。本研究将为组织工程化软骨移植提供无致瘤性、增殖可控、表型稳定的种子细胞，进而为OA的病因治疗提供新的途径和借鉴。

81071460项目主要研究“OA病因治疗中软骨组织工程化种子细胞的构建及功能鉴定”。在3个年度(2011年-2013年) 研究工作中，本项目按计划进行，并取得丰硕成果：.1..构建了无致瘤性、增殖可控、表型稳定的新型骨细胞株，细胞内IGFBP-6、SV40LTAG、糖胺多糖、Ⅱ型胶原等因子稳定表达，体外鉴定可见软骨细胞具有一定的分化能力及增殖活性，可合成Ⅱ型胶原和Ⅹ型胶原；.2..干预细胞内IGFBP-6活性，则Fas、ERK、PI3K等重要信号传导通路因子的磷酸化发生改变，细胞的增殖和凋亡发生改变；.3..新型骨细胞株应用于兔膝关节OA动物软骨缺损，可观察到新形成的纤维软骨组织，组织内糖胺多糖、Ⅱ型胶原和IGFBP-6等蛋白表达稳定；.4..发现OA病因中新的干预靶点---IGFBP-6，为OA软骨损伤机制及基因治疗的研究提供新的理论依据；.5..科研成果以国际SCI收录的科研论著发表7篇，中文医学核心期刊发表科研论著 2篇；.6..培养从事这一研究领域的研究生：博士生2 名，硕士生4名；.7..申报并获得辽宁省科学技术成果及进步奖三等奖。