接受性腺毒性化疗大鼠的卵巢功能保护重建：新型玻璃化冷冻卵巢组织移植与GnRHa药物的对比研究

随着化疗药物和方案的不断更新，恶性肿瘤患者的预后正逐步改善，生存期明显延长，部分患者甚至可以治愈。但化疗药物对女性卵巢功能的损害会在很长的时间里甚至终身严重影响患者的生活质量。在化疗期间使用促性腺激素释放激素激动剂（GnRHa）可以有效保护卵巢组织；而通过移植冻融的正常卵巢组织来重建化疗损伤的卵巢功能则更为高效，是研究热点。在前期工作的基础上，本研究使用性腺毒性化疗药物环磷酰胺（CTX）造成大鼠卵巢功能损伤，分别应用GnRHa药物和玻璃化冻融卵巢组织移植两种方法保护和重建卵巢功能，评价化疗后卵巢内分泌功能及生殖功能的恢复状况。研究首次对比自主创新的玻璃化冷冻方法（NIV）与传统GnRHa药物在化疗性卵巢损伤的保护作用。本次研究将验证新型玻璃化冷冻方法在保存卵巢组织方面的高效性，以及冻融卵巢组织移植重建化疗后卵巢功能的可靠性；为化疗性卵巢功能衰竭患者的临床治疗提供实验基础。

研究背景. 随着恶性肿瘤治疗的不断进步，患者预后得到了很大的改善。与此同时，化疗药物的卵巢毒性作用严重影响了女性患者的生活质量。如何在化疗后重建患者的卵巢功能具有重要临床意义。本研究首次使用化疗药物导致卵巢损伤的大鼠模型，探索卵巢组织NIV法冷冻与移植技术在化疗后重建卵巢功能的可行性。为今后化疗性卵巢损伤的康复治疗提供实验基础。.方法 .研究选用70只8～9周龄健康的SPF级近交系雌性Lewis大鼠，随机抽取14只大鼠作为卵巢供体，采用NIV法冷冻保存备用，其余56只大鼠随机分为4组。对照组（N组）：每日腹腔注射2 mL生理盐水，连续21 天；环磷酰胺组（C组）：腹腔注射环磷酰胺，首剂量50mg/kg，维持剂量10mg/kg，连续21天；GnRHa组（CG组）：环磷酰胺用法同C组，在环磷酰胺开始前7天，皮下注射亮丙瑞林140ug/只；移植组（CT组）：环磷酰胺用法同C组，环磷酰胺结束后切除双侧卵巢，将冻融卵巢组织原位移植入卵巢囊内。比较各组大鼠一般情况、动情周期恢复时间、卵巢重量、卵巢组织形态学改变、各级卵泡计数、怀孕产仔情况等。.结果.使用环磷酰胺成功造成大鼠卵巢损伤。与C组和CG组相比，CT组大鼠恢复正常动情周期时间显著缩短（P=0.006）。环磷酰胺结束4周后观察到CT组卵巢移植物生长良好，外观近似N组，镜下可见各级正常卵泡及较多窦状卵泡；而C组和CG组卵巢均可见色泽异常，有组织内出血现象。卵泡计数显示C组始基卵泡计数显著减少；CG组始基卵泡计数亦进行性下降，至环磷酰胺处理结束4周后已显著低于N组和CT组；而CT组卵巢移植物在环磷酰胺结束4周后始基卵泡数与N组无显著差异，多于C组和CG组。交配后各组大鼠怀孕率无统计学差异，CT组大鼠产仔率为100%，平均产仔数为3.5只，虽略低于N组（100%，6.3只），但明显高于C组（20%,1.6只）和CG组（0,0只）。.结论 .NIV法冻融卵巢组织原位移植技术用于化疗性卵巢损伤大鼠模型，能够安全有效地重建卵巢的内分泌和生殖功能。该方法对化疗损伤卵巢的功能恢复作用优于GnRHa。