改良玻璃化冷冻人卵巢组织体外干预移植物微循环重建机制研究

卵巢组织冷冻结合卵巢移植技术是卵巢早衰易患人群重建卵巢功能最有前景的研究方法。卵巢功能重建包括卵巢内分泌功能和生育能力的恢复。我们前期研究采用超细针灸针作为玻璃化冷冻的一种新载体（NIV法），初步改善了卵巢组织的冻存效果，但冻融卵巢组织移植后缺血缺氧损伤和微循环重建仍是难点问题，本项目拟进行NIV法冻融卵巢组织移植后微血管重建相关机制研究，采用蛋白芯片技术检测冷冻前后卵巢间质表达的血管生成相关因子及信号通路蛋白等表达水平差异，以筛选培养体系添加物，在移植前进行短期体外培养并添加干预因子调控新血管生成和间质修复再生，降低缺血缺氧和凋亡发生，促进卵巢移植物新生血管生成和维持血管稳定性，并通过卵巢异种移植模型筛选相应干预措施， 改善卵巢移植物微循环重建，本项目首次将微循环重建与间质完整性相联系，使冻融卵巢移植后功能得以早期和长期恢复，为优化和改进女性生育力保存体系提供研究思路。

卵巢冷冻是女性生育力保存的重要方法。但移植后缺血再灌注损伤对卵泡和基质造成巨大损伤。为探索改善人卵巢移植物血管重建和基质修复的方法，提高移植物质量，本项目通过蛋白芯片技术筛选有效添加物，建立NIV冷冻法冻融人卵巢组织短期体外培养后异种移植模型，评估移植后效果，采用免疫组织化学法、PCR法检测微血管密度、间质细胞增殖和凋亡、卵泡计数及VEGF基因表达水平。主要结果发现：高通量蛋白芯片分析筛选出冷冻前后人卵巢组织显著性差异蛋白Angiogenin及bFGF。NIV法冻融人卵巢组织在体外培养液中添加200ng/ml Angiogenin培养5天后异种移植后血管重建作用最佳，间质细胞凋亡降低。添加100ng/ml和150ng/ml bFGF体外培养2天后人卵巢组织异种移植后血管重建作用最佳，间质细胞增殖增加。并且bFGF可以上调人卵巢组织中VEGF、MCP-1和PDGFR和 HGF的水平，并可上调VEGF和VEGFR-2基因表达水平。以上研究提示：添加Angiogenin及bFGF至体外培养体系中并培养适当时间，对NIV法冻融人卵巢组织短期移植后血管重建及基质保护有明显促进作用。