基于络病学和JAK/STAT、MAPK通路活血化瘀通络法治疗大鼠输卵管炎性不孕的研究

Salpingitis is a common cause of infertility in women.In TCM activating blood circulation to dissipate blood stasis is basic therapy.Some doctors think it should be "collaterals", but the application is limited because of lack of theoretical support.The research group introduce ’ collateral disease theory' to the treatment of salpingitis infertility for the first time，suggest that the basic therapy for tubal inflammatory obstruction should be Huoxue Huayu Tongluo. The development of inflammation is regulated by intracellular signal transduction pathways. Studies show that both JAK/STAT and MAPK pathways are important inflammatory pathways, and the two have synergistic effects. The study object of this study is Huoxue Huayu Tongluo method, with Huoxue Huayu method and Tongluo method as the control. Through the study of the influence on the pregnancy rate and the morphology of the fallopian tube in the model rats,to reveal the difference in the intervention effect of the above different treatments on tubal inflammatory infertility.On this basis, we applied gene transfection, primary culture,RT-PCR, EMSA and ELISA technology to study the different regulation of these different therapies on the key signaling molecules and inflammatory effectors of JAK/STAT and MAPK pathway in fallopian tubes and epithelial cells. Through the above study to clear whether the method of activating blood circulation to remove stasis and the other method of dredging collaterals has synergistic effect.To provide theoretical basis from cell and molecular level for treating tubal inflammatory infertility by Huoxue Huayu Tongluo,and ultimately promoting Huoxue Huayu Tongluo as the basic method in clinical application of tubal inflammatory infertility, so as to guide clinical treatment.

输卵管炎是女性不孕的常见病因，传统医学以活血化瘀为基本治法，并辩证加减。部分医家认为宜“通络”，但因缺乏理论支撑而应用受限。课题组首次结合“络病”理论，提出：根据“络以通为用”治则，输卵管炎性阻塞的基本治法应为活血化瘀通络。炎症的发展受细胞内信号通路调节，研究表明，JAK/STAT和MAPK通路均为重要的炎症传导通路，二者存在协同作用。课题以活血化瘀通络法为研究对象，分别以活血化瘀及通络法为对照，通过研究对模型大鼠妊娠率及输卵管微观形态的影响，对比各组干预差异；在此基础上，应用基因转染、原代培养、RT-PCR、EMSA、ELISA等技术，研究各治法对输卵管及其上皮细胞JAK/STAT、MAPK通路关键分子的调节差异。通过上述研究明确活血化瘀和通络法有无协同增效作用。为深入阐明血化瘀通络法治疗输卵管炎性不孕提供理论依据，最终推广活血化瘀通络作为基本治法在该病的临床应用，指导临床治疗。

一、背景及研究内容：输卵管炎性不孕约占女性不孕的 30%～35%，传统医学以活血化瘀为基本治法，并辩证加减。课题组首次结合“络病”理论，提出：根据“络以通为用”治则，输卵管炎性阻塞的基本治法应为活血化瘀通络。为明确活血化瘀和通络法有无协同增效作用，探寻活血化瘀通络法和方药治疗输卵管炎性不孕的现代理论依据，课题以活血化瘀通络法为研究对象，分别以活血化瘀法及通络法作为对照，通过研究对模型大鼠妊娠率及输卵管微观形态的影响，从功能、组织形态上揭示上述不同治法对输卵管炎性不孕干预作用的差异。在此基础上，研究上述不同治法对输卵管及培养的输卵管上皮细胞 JAK/STAT 及 MAPK 炎症信号通路的调节差异，阐明其作用机制。从功能到形态、从细胞到分子水平为活血化瘀通络法治疗输卵管炎性不孕提供理论依据，以此指导临床，推广其临床应用。. 二、重要结果：活血化瘀法和通络法存在协同增效作用，以JAK/STAT、MAPK信号通路为主要指标，活血化瘀通络法对输卵管炎的治疗作用，明显优于单纯使用活血化瘀法或通络法。. 三、关键数据：ELISA 大鼠输卵管组织 IL-1β 、 IL-6、IL-8, TNF-α 、 myeloperoxidase（MPO） 含量。Western blot 检测大鼠输卵管组织中JAKs，P-JAKs，STATs，P-STATs 及 MAPKs、P-MAPKs 的表达。免疫组化分析药物干预显著抑制 p65 转移至细胞核并且维持较高的 IκB-α含量。. 四、科学意义：不孕症被认为是生殖健康缺陷的一种，给夫妻双方带来极大的心理负担。不孕症的病因中，输卵管炎性阻塞约占女性不孕的30%～35%。本研究证实了活血化瘀通络法及方药能有效降低大鼠输卵管上皮细胞中相关炎症因子含量，改善输卵管功能，可指导临床对于女性输卵管炎性不孕的药物治疗。