喉鳞癌隐匿性颈淋巴结转移分子分型的研究

喉鳞癌颈淋巴结转移的早期诊断和分子预测一直是研究的难点和热点。本项目在前期工作的基础上，结合蛋白质组学和量子点纳米技术，对喉鳞癌隐匿性颈淋巴结转移的分子分型进行研究。首先，应用蛋白质组学技术筛选出喉鳞癌颈淋巴结转移相关蛋白差异表达谱，结合前期基因芯片结果并通过验证分析初步确定3～5个与颈淋巴结转移相关分子标志物；然后应用量子点纳米检测技术获得各分子标志物在喉鳞癌细胞及其亚结构（细胞膜、细胞浆和细胞核）的表达量值，通过特制量子点纳米技术分析软件等进行统计分析，最终获得2－3个颈淋巴结早期转移相关的分子指标及其表达量值，据此对喉鳞癌隐匿性颈淋巴结转移进行分子分型；根据分型结果对喉鳞癌患者早期淋巴结转移进行分子预测，评估该分型方法的准确性。本研究将可能为早期精确诊断或预测喉鳞癌隐匿性颈淋巴结转移提供新的分子分型方法，为喉鳞癌治疗方案的选择给予非常有价值的研究依据。

喉鳞癌颈淋巴结转移的早期诊断和分子预测一直是研究的难点和热点。本项目结合蛋白质组学和量子点纳米技术，对喉鳞癌隐匿性颈淋巴结转移的分子分型进行研究。首先，应用蛋白质组学技术筛选出喉鳞癌颈淋巴结转移相关蛋白差异表达谱，结合前期基因芯片结果并通过验证初步确定EphA2，MTDH，RCP3个与颈淋巴结转移相关分子标志物。在大样本组织标本中阐明EphA2，MTDH及RCP与头颈鳞癌的转移密切相关，在预后评估中发挥重要作用，为头颈鳞癌潜在的分子标志物。进一步在体外实验中证明了EphA2及MTDH能在体内外实验中调控头颈鳞癌的侵袭转移。分子机理研究表明EphA2可通过p38信号通路介导的肿瘤血管新生发挥促头颈鳞癌转移作用；而MTDH则是通过AKT通路介导的上皮-间质转化（EMT）调控头颈鳞癌的侵袭转移。最后，应用量子点纳米平台（包括量子点纳米免疫荧光染色、CRi Nuance“机器学习识别”及单细胞亚结构量子点荧光定量分析技术）在喉鳞癌组织标本中，获取eIF-4E、E-cad、β-cat和EphA2等各分子指标在每个病例的平均表达量值（a.u.）、膜表达量值（M-a.u.）和核表达量值（N-a.u.），结果表明E-cad和EphA2 M-a.u.、β-cat的N-a.u.可作为预测喉鳞癌是否发生早期转移的分子指标。同时根据预设的界定值（cut-off value）标准，随机在N0组和N1组中各抽取10例按照最佳诊断收益方式等进行统计分析和诊断试验评价分析，结果发现EphA2的M-a.u.和β-cat的N-a.u.联合诊断在两组中的预测率最高。结合临床相关资料回顾性研究和统计分析，我步确立EphA2的M-a.u.和β-cat的N-a.u.作为预测喉鳞癌早期颈淋巴结转移相关的分子指标。.在该项目经费的资助下，共培养博士研究生6名，硕士研究生7名，其中毕业6名；再次获“863”子项目1项，国家自然科学基金1项及高等学校博士学科点专项科研基金1项；共发表SCI论文7篇，中文核心期刊论文11篇；获湖南医学科技奖一等奖1项。