miR-133a参与乳腺癌侵袭转移的调控及其机制

研究表明，微小RNA分子miR-133a在肿瘤侵袭转移的调控中扮演了重要角色，已成为目前研究热点。我们先期研究发现miR-133a可作用于重要的细胞迁移分子FSCN1，进而抑制乳腺癌侵袭。HER-2是公认的促乳腺癌侵袭转移分子，可增强癌细胞表达FSCN1。在HER-2高表达乳腺癌中miR-133a表达有下调趋势。探究miR-133a参与乳腺癌侵袭转移的调控，并阐明HER-2对miR-133a的调控机制，对解决HER-2单靶向治疗有效率低下和耐药难题，寻求新的替代性或联合性靶向治疗分子具有极其重要的意义。我们拟在先期初步观察HER-2/miR-133a/FSCN1对乳腺癌侵袭作用的基础上，进一步通过生物信息学、分子生物学及动物实验等手段阐明乳腺癌侵袭过程中miR-133a的调控机制及其在HER-2信号通路中的位置和作用，从而为临床靶向干预肿瘤侵袭转移提供新的思路和理论基础。

微小RNA（miRNA）是一类内源性单链RNA，在乳腺癌的发生发展过程中发挥了重要作用。研究miRNA的表达、功能和机制能够为乳腺癌提供有价值的标志物。本研究首先使用原位分子杂交技术检测了石蜡包埋的26例良性乳腺组织，34例癌旁乳腺组织和90例乳腺癌组织miR-133a的表达；其次使用实时定量PCR技术检测了6株乳腺上皮细胞，10例良性乳腺和18例乳腺癌新鲜组织中miR-133a的表达；功能实验检测miR-133a对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭功能的作用；通过荧光报告载体系统检测FSCN1是否为miR-133a的直接靶基因；采用免疫组化MaxVision两步法检测124例乳腺癌和27例乳腺良性病变组织中FSCN1蛋白的表达；采用原位分子杂交法检测63例乳腺癌和30侧乳腺良性病变组织中FSCN1 mRNA的表达；用干扰RNA技术沉默人乳腺癌细胞株MCF-7中FSCN1基因的表达，通过MTT实验检测细胞增殖能力；通过基因芯片分析MCF-7/HER-2过表达细胞与MCF-7裸细胞，BT474裸细胞与BT474 siRNA HER-2细胞miRNAs的差异性表达并实验验证部分结果。结果发现乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中miR-133a表达较良性乳腺和乳腺正常上皮细胞株均显著下调；miR-133a表达与乳腺癌淋巴结转移、临床分期和预后显著相关；miR-133a能够显著抑制乳腺癌细胞侵袭和迁移能力；实验证实FSCN1是miR-133a的直接靶基因；FSCN1在乳腺癌和乳腺良性病变组织中的阳性率分别为37.9%和51.9%；FSCN1阳性率随肿瘤组织学分级的增高而增高；ER、PR阴性乳腺癌患者的FSCN1阳性率明显高于阳性患者；转染FSCN1 siRNA后，MCF-7细胞的增殖活性较对照组明显降低；FSCN1 mRNA在乳腺癌中的阳性率为65.1%，在乳腺良性病变中的阳性率为90.0%，差异有显著性；FSCN1 mRNA和蛋白在乳腺癌中表达具有显著相关性。HER2可以调控多种miRNAs表达，包括miR-181a-5p、miR-877-3p、miR-1827和miR-3653。本研究显示miR-133a/FSCN1信号通路在乳腺癌研究过程中可能发挥重要作用，miR-133a和FSCN1可以作为监测乳腺癌病情进展和判定预后的潜在标志物；HER2参与乳腺癌组织中miRNAs的调控。