miR-133a 通过负调控HLA-G参与反复自然流产的分子机制

Recurrent Spontaneous Abortion (RSA) is one of the most important reasons of infertility. HLA-G is specific expressed in extravillous trophoblast cell (EVC), which avoid the fetus immunologic rejected by mother and play a key role in successful pregnancy. However, so far, the molecular mechanism of HLA-G expressed regulation is still unknow, hence, could not establish the specific clinical treatment of RSA. On our previous study, we believed that miR-133a mediated RSA by down-regulating HLA-G expression, which suggested that we might restored the immune tolerance in the maternal-fetal interface by regulating miR-133a expression. Therefore, we would apply flow cytometry, gene expression and Elisa etc technologies, to observed the spatio-temporal specificity of miR-133a expression and the regulatory role of HLA-G isoform and EVE immune function in the villi tissue and TEV-1 cell line, to further verify the potential effect in the early pregnance, to approach the molecular mechanism of miR-133a mediating RSA. The study will reveal a new mechanism of pathogenesis of RSA and provide a new target for clinical cure, which have important academic and practical significances.

反复自然流产(RSA)是导致不孕不育的重要原因之一。特异表达于人类绒毛外滋养层细胞（EVC）的HLA-G分子诱导的母胎免疫耐受，是保障早期妊娠顺利进行的关键，但调控HLA-G表达的具体分子机制迄今尚未阐明，因此无法建立针对性的RSA特异疗法。我们在既往研究的基础上，提出miR-133a负调控HLA-G参与RSA发生，提示，通过调控miR-133a表达，有可能重建或者恢复RSA患者母胎界面正常的免疫耐受。为此，本研究拟采用流式细胞术、基因表达分析、Elisa等技术，在绒毛和TEV-1细胞系中，观察miR-133a表达的时空特异性以及对HLA-G亚型的特异性调控和对EVC免疫功能的调节作用，进而在人类早期胚胎中，验证miR-133a对早期妊娠结局的潜在影响，探讨miR-133a参与RSA发生的分子机理，揭示RSA发病的新机制，为寻找新的治疗靶点提供依据，具有重要的理论和实际意义。

复发性流产（RSA）是常见的妊娠并发症，免疫学异常是导致RSA的重要原因。已研究表明HLA-G低表达与RSA密切相关。妊娠早期，CD56bright 自然杀伤细胞（nature killer，NK）大量聚集在母体蜕膜组织中，直接与胎儿的绒毛外滋养层细胞（EVT）接触，可通过促进EVT向母体侵袭、促进子宫血管形成及螺旋动脉重塑、促进免疫耐受三方面维持正常妊娠。但是目前对HLA-G与蜕膜NK细胞（dNK）在反复自发流产过程中的作用，尚不清楚。.在本项目中，我们主要研究内容包括：筛选出了与HLA-G表达相关的miR-133a，且证实了miR-133a在RSA流产绒毛高表达，且其通过作用于HLA-G的3’非编码区负调控HLA-G的表达；进一步研究了miR-133a高表达可抑制滋养层细胞的侵袭和粘附，促进滋养层细胞的凋亡；最后发现miR-133a通过负调控HLA-G的表达，影响蜕膜NK细胞功能，进而抑制母胎血管网络的建立，最终引起流产。.我们发现，RSA患者dNK 细胞KIR2DL4受体较人工流产患者表达显著下调（P＜0.05）。RSA患者dNK分泌IP-10、VEGF显著降低，这两种细胞因子前者为促侵袭因子，后者为促血管形成因子。RSA患者dNK分泌的细胞因子使 HTR-8/SVneo细胞侵袭能力显著减弱，使HUVECs血管生成能力显著减弱。转染了miR-133a inhibitor 的HTR-8/SVneo细胞高表达HLA-G，转染了miR-133a mimics的HTR-8/SVneo细胞低表达HLA-G。共培养体系中，与转染了miR-133a mimicis的HTR-8/SVneo细胞共培养的上清IL-8、IP-10、VEGF细胞因子浓度都显著降低（P＜0.05），培养上清使HTR-8/SVneo细胞侵袭能力显著减弱，使HUVECs血管生成能力显著减弱。加入KIR2DL4抗体的共培养体系上清上述细胞因子浓度也显著降低，上清同样使HTR-8/SVneo细胞侵袭能力显著减弱，使HUVECs血管生成能力显著减弱。.我们的研究表明miR-133a负调控HLA-G可能通过KIR2DL4调节dNK细胞的分泌功能，进而影响滋养层细胞侵袭和血管形成，为深入探讨导致RSA发生的机制提供可能的理论依据以及为治疗RSA提供可能的靶点。