SNARE蛋白复合体在花粉管顶端生长中的构成与作用

By fluorecent labeling methods, coupling confocal microscopy observation, the distribution and relation of AtSYP131, AtSNAP30 and AtVAMP725 will be observed in pollen tubes. By T-DNA and overexpress methods, we wish to change express level of AtSYP131 gene in Arabidopsis, and analyse the function of AtSYP131 for exocytosis and tip-growth in pollen tube. By Yeast two-hybrid, GST pull-down and BiFC methods, we wish to analyse the relation between AtSYP131, AtSNAP30 and AtVAMP725. After this project finish, we wish to determine the structure and function of SNARE complex in pollen tube tip-growth. These results will help us to understand farther the mechanism of pollen tube tip-growth.

利用GFP和RFP载体转化、抗体免疫荧光标记等方法研究AtSYP131等SNARE蛋白在花粉管内的分布和相关；利用T-DNA插入突变、过表达等方法，分析AtSYP131等Qa-SNARE蛋白在花粉管顶端生长方面的作用；利用酵母双杂交、pull-down、BiFC等方法，分析花粉管中SNARE蛋白AtSYP131、AtSNAP30及AtVAMP725间相互关系。在本项目的研究基础上，确认AtSYP131等SNARE蛋白在花粉管顶端囊泡分泌中的相关与作用。以期更深入理解特定SNARE蛋白复合体在花粉管顶端生长中的构成与作用。

GUS报告基因显示，SNARE 蛋白AtSYP131与AtSNAP30主要在拟南芥花粉和花粉管内特异表达；利用GFP 和RFP 载体转化、抗体免疫荧光标记等方法研究发现，AtSYP131 及AtSNAP30蛋白主要定位在拟南芥及烟草花粉管质膜上，其中AtSYP131蛋白与AtSNAP30蛋白在花粉管质膜上存在部分共分布；利用酵母双杂交、荧光素酶双分子荧光互补（LUC）及微量热泳动（MST） 等方法，分析花粉管中大量表达的SNARE 蛋白AtSYP131、AtSNAP30 及AtVAMP725 间相互关系，研究发现AtSNAP30与AtSYP131及AtVAMP725间存在互作；利用T-DNA 插入突变等方法，分析AtSYP131蛋白及AtSNAP30等蛋白在花粉管顶端生长方面的作用，研究发现无论单突变体还是AtSNAP30与AtSYP131双突变体，其花粉管生长速度均慢于野生型。以上研究结果表明， AtSNAP30与AtSYP131及AtVAMP725蛋白在花粉管顶端质膜上构成SNAREs复合体，AtSNAP30与AtSYP131与拟南芥花粉管顶端生长密切相关；由于此前我们已经发现AtVAMP725主要定位于花粉管顶端囊泡上，因此我们认为，由AtSNAP30与AtSYP131及AtVAMP725等蛋白形成的SNAREs复合体可能通过介导顶端囊泡与质膜融合，进而调控花粉管顶端生长。有关结果对理解花粉管顶端生长机理具有重要的理论意义。.在本项目及其它项目支持下，我们已发表两篇SCI论文；另有两篇文章正在整理中，期望在近期投稿高影响因子SCI刊物。