FTCD-L蛋白在植物细胞高尔基体上的分布与作用

构建拟南芥FTCD-L基因的GST标签原核表达质粒，在细菌中诱导表达FTCD-L蛋白；利用GST亲和层析柱纯化FTCD-L蛋白，并制备相应的特异抗体；通过免疫标记方法，结合荧光和电子显微镜观察，精确确定FTCD-L蛋白在植物细胞高尔基体上的分布。通过共沉淀等方法，分析FTCD-L蛋白是否与微管结合；通过免疫荧光双标方法，分析FTCD-L与微管骨架在植物细胞中的相关；通过双转化方法，观察FTCD-L在拟南芥细胞中沿微管的动态分布。利用RNAi、T-DNA插入突变和超表达等分子遗传学方法，抑制或改变FTCD-L基因在拟南芥中的表达程度，并结合高尔基体分布与结构的荧光和电镜观察，分析FTCD-L蛋白在植物细胞高尔基体结构与功能方面的调控作用。我们希望在本项目的研究基础上，提出植物细胞内FTCD-L蛋白与微管骨架相互作用，进而参与高尔基体结构与功能调控的新观点。

构建了拟南芥FTCD-L 基因的His标签原核表达质粒，在细菌中诱导表达FTCD-L 蛋白；利用和层析柱纯化到FTCD-L 蛋白，并制备了相应的特异抗体；通过免疫印迹方法，确定该蛋白分子量约为33kDa，与理论预测的分子量相符。通过免疫标记方法，结合荧光和电子显微镜观察，精确确定FTCD-L 蛋白定位在植物细胞高尔基体上TGN的囊泡外周；并确定蛋白N端在与高尔基体TGN结合方面其主要作用。通过共沉淀等方法，发现FTCD-L 蛋白无法与微管结合。利用T-DNA 插入突变和超表达等分子遗传学方法，抑制或改变FTCD-L 基因在拟南芥中的表达程度，发现当在含高浓度琼脂（1-3%）的1/2MS培养基中生长时，培养7天的过表达拟南芥植株根的生长速度比野生型要快，而T-DNA line根的生长速度则慢于野生型。进一步分析发现，T-DNA line的根冠细胞分泌能力低于野生型拟南芥。有关研究表明，植物FTCD-L蛋白在高尔基体TGN囊泡形成或分泌方面起重要作用。