甘露聚糖结合凝集素对T淋巴细胞免疫功能的调节作用及其机制

天然免疫指导获得性免疫应答的研究方兴未艾，但未见甘露聚糖结合凝集素（MBL）与获得性免疫关系的报道。我们最近发现MBL可抑制T细胞活化剂诱导的T细胞增殖及IL-2与IFN-γ分泌，提示MBL可通过与T细胞相互作用而调节获得性免疫应答。据此提出本项目，拟就MBL（包括3种突变型MBL蛋白）对T细胞的调节作用进行下述研究：①直接调节作用，包括对T细胞表型、细胞增殖、细胞因子产生、信号转导途径的影响；②间接调节作用，包括对树突状细胞表型、吞噬及抗原提呈功能及其信号转导途径的影响。其创新之处及意义在于：①提出MBL通过直接和/或间接作用调控T细胞活性和功能的新观点，将丰富天然免疫特别是其指导获得性免疫应答的基础理论，并为MBL失衡和T细胞功能紊乱有关疾病的防治研究提供新的理论依据和靶点。②从免疫调节功能紊乱这一全新的角度阐述MBL缺损的发病机理，为该缺损的诊治研究提供新的理论依据和策略。

随着天然免疫研究的深入，发现胶凝素家族的一些成员和获得性免疫之间的联系越来越紧密。前期研究证实甘露聚糖结合凝集素(mannan binding lectin, MBL)可与多种免疫细胞结合，调节细胞因子的分泌。. 本研究发现，MBL可抑制anti-CD3 mAb诱导的PBMC中CD4+T细胞和CD8+T细胞的增殖。ELISA结果显示，不同浓度MBL均抑制Con A诱导的PBMC分泌IL-2、IL-10与IFN-γ，但明显上调IL-6分泌。抗MBL-MASP mAbs可阻断MBL对IL-2、IFN-γ分泌的抑制作用。以上结果提示MBL可抑制T细胞的增殖与活化，为进一步研究MBL对纯化T细胞功能的直接调节作用奠定了基础。进一步分析，MBL可抑制anti-CD3 mAb、anti-CD3 mAb+anti-CD28mAb刺激的CD4+T细胞和CD8+T细胞的增殖。ELISA结果显示，在不同时间，MBL均抑制激活T细胞分泌IL-2、IL-10、IFN-γ、IL-17a。.为初步探讨MBL对T细胞免疫调节功能的机制，我们分析了MBL与T细胞及Jurkat细胞的结合。结果表明，MBL可直接与T细胞以不依赖钙离子的方式结合，MBL对T细胞的直接调节作用是通过其CLR区而非CRD区。MBL与Con A共同刺激T细胞，T细胞早期活化标志CD69表达下降，晚期活化标志HLA-DR表达没有明显改变；外源性IL-2可阻断MBL的抑制作用，提示MBL通过抑制T细胞活化而非诱导T细胞凋亡而发挥抑制作用。. 在Mo向DC早期分化过程中，MBL可使细胞表面CD1a表达降低，分泌IL-10和IL-6增多，能抑制T细胞增殖。DC前体细胞中STAT5和JNK活性减弱但激活STAT3；还发现MBL抑制ERK的磷酸化。表明MBL可能通过抑制Jak2/STAT5信号途径而阻断Mo向DC分化。还发现高浓度MBL可抑制LPS-诱导的DC和THP1细胞成熟和促炎细胞因子（如IL-12和TNF-α）表达，抑制DC活化异体T细胞的能力。. 综上，本课题研究发现，MBL可抑制由T细胞激活剂诱导的PBMC及T细胞的增殖及多种细胞因子的分泌，初步获得了MBL与T细胞结合的直接证据，并提出MBL还可能通过调节APC分泌细胞因子进而参与对T细胞的调节。