mTOR特异性siRNA治疗性靶向载体疫苗的实验研究

利用经过基因改造的耻垢分枝杆菌Ms1-2c作为载体，靶向递送小干扰RNA真核表达质粒，使其在MΦ内定位表达mTOR 特异性的siRNA，高效特异地抑制mTOR表达，诱导MΦ自体吞噬，有效地杀灭MΦ内感染与潜伏的Mtb，然后分别从分子、细胞和动物实验水平研究其抗Mtb感染的效果及机制。一方面，该靶向载体疫苗进入MΦ后通过上调自噬水平充分调动MФ的杀菌机制，直接高效地清除胞内感染的Mtb。另一方面，作为载体的耻垢分枝杆菌具有MФ靶向性，可实现表达质粒在MФ内的定位表达。耻垢分枝杆菌还具有促进Th1型免疫应答，抑制Th2型免疫应答的双向免疫调节功能，能将Mtb感染机体失衡的免疫应答状态纠正到平衡状态，促进机体对Mtb的彻底清除。有望克服潜伏感染、多重耐药和再燃等结核病治疗难题，为开辟一条结核病防治的新思路奠定理论基础。

构建mTOR siRNA 重组表达质粒，利用经过基因改造的耻垢分枝杆菌Ms1-2c 作为载体，靶向递送小干扰RNA 真核表达质粒，使其在MΦ 内定位表达mTOR mRNA 特异性的siRNA，抑制mTOR 表达，诱导MΦ自体吞噬，有效地杀灭MΦ内感染的与潜伏的Mtb。课题组成功构建了上述重组质粒，并从基因和蛋白水平证实了构建的真核表达质粒可降低mTOR基因和蛋白的表达，增强MΦ自噬反应，有效杀灭胞内感染的Mtb，小鼠体内实验也表明该重组疫苗可增强细胞免疫应答，具有杀灭和清除胞内感染菌的潜力。