Oct4磷酸化位点的确定及其在细胞重编程及胚胎干细胞自我复制中的功能研究

细胞重编程这一突破性的技术将对干细胞生物学和再生医学产生深远影响，自我复制则是诱导性多能干（iPS）细胞及胚胎干（ES）细胞研究中的核心问题之一。Oct4是控制细胞多能性的关键转录因子，而蛋白质磷酸化是最常见且最重要的蛋白质翻译后修饰方式，那么Oct4磷酸化在细胞重编程及ES细胞自我复制过程中有什么样的功能却知之甚少。本项目通过体外磷酸化及生物信息学的方法确定磷酸化Oct4的靶激酶及其磷酸化位点；在此基础上通过启动子报告基因系统确定该磷酸化位点对Oct4转录活性的影响；根据磷酸化位点制备Oct4磷酸化抗体，通过免疫印迹确定在ES细胞中是否存在Oct4磷酸化；构建包装Oct4及其磷酸化位点突变体的慢病毒，感染小鼠神经前体细胞及ES细胞，研究Oct4磷酸化对于神经前体细胞重编程及ES细胞自我复制的影响。Oct4磷酸化功能的研究有助于我们更深入的理解细胞重编程及ES细胞自我复制的分子机制。

细胞重编程这一突破性的技术将对干细胞生物学和再生医学产生深远影响，自我复制则是诱导性多能干（iPS）细胞及胚胎干（ES）细胞研究中的核心问题之一。Oct4是控制细胞多能性的关键转录因子，而蛋白质磷酸化是最常见且最重要的蛋白质翻译后修饰方式，那么Oct4磷酸化在细胞重编程及ES细胞自我复制过程中有什么样的功能却知之甚少。本项目经过三年的研究，基本完成了所有目标：通过体外磷酸化及生物信息学的方法确定磷酸化Oct4的靶激酶及其磷酸化位点T343；在此基础上通过启动子报告基因系统确定该T343磷酸化位点对Oct4转录活性的影响；根据磷酸化位点制备Oct4 T343磷酸化抗体，通过免疫印迹确定在ES细胞中存在Oct4T343磷酸化；构建包装Oct4及其T343磷酸化位点突变体的慢病毒，感染小鼠体细胞及ES细胞，证实来Oct4T343磷酸化对于体细胞重编程及ES细胞自我复制的具有重要影响。Oct4磷酸化功能的研究有助于我们更深入的理解细胞重编程及ES细胞自我复制的分子机制。