ZNF365基因与汉族人特应性皮炎发病机制相关性研究

Atopic dermatitis (AD) is a common chronic relapsing, inflammatory skin disorder,which is difficult to cure and seriously affects human physical and mental health. Many studies point that genetic factors are closely relative to pathogenesis of AD. However,its specific pathogenesis remains unclear.Based on previous AD genome-wide association study(GWAS) data,the applicant carried out a further study screening susceptibility gene of AD, which identified a new susceptibility gene ZNF365(the genetic marker rs2393903,P=2.06×10-9).Through detecting four different transcripts A-D of ZNF365 mRNA expression levels,we found that ZNF365D mRNA expression levels showed a significate decrease in the skin leision of AD cases.Based on the findings of preliminary studies,we aim to perform Sanger sequencing and Sequenom validation for ZNF365D gene to identify the causal variants of ZNF365D.In addition, we will carry out a series of gene functional study(such as RT-PCR、western-blot、luciferase reporter gene experiment and flow cytometry,etc) for identified causal variants of ZNF365D gene to uncover the roles of causal variants within ZNF365D gene in disease pathogenesis.It will lay the foundation for further study in AD pathogenesis and effective treatment.

特应性皮炎（AD），是一种常见慢性复发性炎症性皮肤病，难以根治，严重危害患者身心健康。研究表明遗传因素与AD发病密切相关，但具体发病机制尚不明确。申请人对前期AD全基因组关联研究（GWAS）中发现的可能易感基因进行深入研究，发现AD新的易感基因ZNF365（遗传标记rs2393903,P=2.06×10-9）。通过对ZNF365基因4种不同转录体A-D的mRNA水平分析，发现ZNF365D的mRNA表达量在病例中显著降低。本研究拟基于前期研究基础，对ZNF365D基因进行深度测序并结合Sequenom基因分型平台验证，鉴定与AD发病直接相关的功能性变异，并进一步利用RT-RCR、western-blot、报告基因实验及流式细胞术等方法对其开展功能学研究，初步揭示其在AD发病中的作用，为深入研究AD发病机制及进行有效治疗奠定基础。

本课题组基于前期发现ZNF365D易感基因区域的基础上，拟通过精细定位和功能学研究验证，鉴定出位于该区域内与特应性皮炎（AD）发病直接相关的功能性致病变异位点，初步揭示其在AD发病中的作用，为深入研究AD发病机制及进行有效治疗奠定基础。主要研究内容：通过对200例AD患者和200例对照ZNF365D基因的启动子区域、外显子、内含子、3’-UTR区域进行测序，筛选出病例/对照中具有显著性差异的位点，并在大样本量中开展验证研究，初步筛选出可能与AD发病相关的变异位点。根据鉴定出的变异位点位于ZNF365D基因上的转录起始点上游，构建含变异位点不同基因型的荧光素酶报告基因载体，进而判断该变异位点是否对基因转录活性产生影响；初步揭示其在AD发病中的作用。但由于测序的样本量过少，没有充分足够的Power效能，导致初筛统计学的偏差，致使挑选的位点并非为真正的差异显著的功能性变异位点。然而，该研究通过对病例和对照的测序，积累了大量的基因分型数据，为后期对该区域的进一步加大样本量测序筛查差异性的变异位点奠定研究基础。此外，本课题组采用候选基因研究方法，对UBASH3A基因及11q23.3区域的代表性单核苷酸多态性位点（SNPs）进行基因分型和验证研究，发现上述二个易感基因位点与AD的发病密切相关。本研究为今后AD的功能学发病机制研究提供方向，有助于开展临床风险评估、疾病预测、诊断以及针对基因的靶点开发新的临床治疗药物奠定了基础。