肉制品中蛋白结合态AGEs的肠道吸收转运机制

Dietary advanced glycation end products (AGEs) plays an important role in the accumulation of AGEs in the body. Clarifying systematically the intestinal absorption and transport mechanism of dietary AGEs is of great importance to elucidate their safety and bioaccessibility. This project intends to investigate the changes of myofibril protein-bound CML, a typical biomarker of AGEs in meat products which have the highest content of AGEs in foods, in the simulated gastrointestinal digestion using size-exclusion chromatography and biomass spectrometry etc. The intestinal absorptivity of digestive components of myofiber protein-bound CML is investigated using Caco-2 cell monolayers and everted rat sacs, the molecular structure of CML is identified by biomass spectrometry. Based on this, the absorption and excretion transport path of bound-CML in different molecular mass are confirmed using selected transport promoter or inhibiter, clarifying the intestinal absorption and transport molecular mechanism of them. This project will provide important theoretical basis for effectively blocking the intestinal absorption and transport of dietary protein-bound CML.

食源性晚期糖基化终末产物（AGEs）是人体内AGEs累积的重要环境因素，系统阐明其肠道吸收转运机制对于明确其安全性及生物可及性具有重要意义。食源性AGEs主要以蛋白结合态形式存在，本项目拟以食品中AGEs含量最高的肉制品为原料，以其中AGEs的代表性标志物——肌原纤维蛋白结合态CML为研究对象，采用体积排阻色谱、生物质谱等方法研究肌原纤维蛋白结合态CML在体外模拟胃肠中的消化特性；以Caco-2单层细胞和大鼠外翻肠囊为肠道吸收模型，结合生物质谱仪阐明肌原纤维蛋白结合态CML水解物中各分子量组分的肠道吸收特性，并对CML分子结构进行鉴定，揭示原肌纤维蛋白结合态CML的肠道吸收本质；在此基础上，运用转运通路促进剂与抑制剂明确各分子量组分结合态CML的主要吸收途径，从分子水平阐明其肠道吸收转运机制。通过本项目的实施，以期为探索有效阻断食品中蛋白结合态CML肠道吸收转运研究提供重要理论依据。

食源性晚期糖基化终末产物（AGEs）是人体内AGEs累积的重要环境因素，系统阐明其肠道吸收转运机制对于明确其生物安全性具有重要意义。本项目以食品中AGEs含量最高的肉制品为原料，以其中AGEs的代表性标志物——肌原纤维蛋白结合态羧甲基赖氨酸（MP-bound CML）为研究对象，采用荧光光谱、电泳、粒径分析、生物质谱等手段探究MP-bound CML在体外模拟胃肠消化过程中的变化情况。结果表明：随着体外模拟胃肠消化时间的增加，MP-bound CML粒径逐渐减小，当肠液消化360 min时MP-bound CML水解液粒径在100 nm-1000 nm范围内，分子量主要在17 kDa以下。经HPLC-QQQ-MS/MS测定可知：MP-bound CML水解液中分子量小于5 kDa的结合态CML占比为68.5%，其中分子量小于1 kDa的结合态CML占比8.9%。之后利用Caco-2单层细胞模型结合生物质谱手段探究MP-bound CML水解物中各分子量CML组分的肠道吸收率及吸收转运方式。结果表明：小于1 kDa 组分的CML吸收率为74.08±8.93%，为易吸收组分，主要通过细胞旁路吸收转运，不存在主动外排；1-3 kDa组分的CML吸收率为42.04±4.22%，为较易吸收组分，主要通过细胞旁路和胞吞作用吸收转运，不存在主动外排；3-5 kDa组分的CML吸收率为50.21±3.57%，为较易吸收组分，主要通过PepT1载体介导的主动运输吸收转运，不存在主动外排；大于5 kDa组分的CML吸收率为3.24±1.71%，为极难吸收组分，存在主动外排情况。通过本项目的实施，以期为探索有效阻断食品中蛋白结合态CML肠道吸收转运研究提供重要理论依据。