重编程人脂肪干细胞向表皮细胞分化与机制的研究

细胞重编程是近年来的重大科学突破。文献证实，细胞重编程的出路未必一定回归胚胎状态，而是能直接赋予细胞以新的成熟命运。供体细胞之细胞抽提物（包含细胞质及细胞核的可溶解成分）引入另一种受体细胞（成体干细胞或成纤维细胞）内，可使受体细胞表达供体细胞表型。前期研究证实将人的表皮细胞抽提物引入到人脂肪干细胞中，可使后者重编程而表达表皮细胞的标志。本试验将进一步研究表皮细胞抽提物对脂肪干细胞的重编程作用，研究重编程的脂肪干细胞向表皮分化后修复创面的可行性，另外，本研究对重编程机理进行了初步研究，对抽提物中的有效重编程物质做初步鉴定。.本研究的成功将有可能为细胞定向诱导分化供新的技术手段，为组织工程人造器官提供种子细胞来源。抽提物重编程技术平台之建立，有利于进一步鉴别、纯化抽提物中的关键物质。

本课题的目的在于通过细胞抽提物重编程的方法改变细胞的表型，使来源丰富的干细胞转分化为目的细胞，则可为临床许多疾病提供治疗所需的细胞。本课题研究将人表皮细胞抽提物引入人脂肪干细胞中，观察能否对后者进行重编程。提取表皮细胞的细胞抽提物（含细胞核和细胞质的可溶解成分）后，将表皮细胞来源的抽提物与通透处理过的脂肪干细胞孵育1小时后用CaCl2重新封闭细胞膜通道并行体外培养。在实验中，我们对表皮来源的抽提物进行了优化处理，通过IV胶原差速贴壁法分选得到表皮干细胞（KSC）与剩余的表皮细胞（KCL），与常规方法收集的表皮细胞（KC）对比，发现KSC在表皮干细胞的特异性表达及重编程效应方面均最显著。脂肪干细胞在表皮细胞抽提物的作用下细胞形态发生变化，呈现铺路石样改变。重编程后的脂肪干细胞表达广谱角蛋白（CK），且BRG1的表达量增加。由实验结果可以表明表皮细胞抽提物重编程脂肪干细胞能一定程度上向表皮细胞方向分化，且分选的表皮干细胞的重编程效应更强。