人脂肪干细胞向表皮干细胞分化的研究

皮肤是人体面积最大的器官, 是机体免于脱水、损伤、感染的第一道防线。临床常用的皮肤缺损修复方法有两类，自体皮移植面临皮源不足，难以及时有效地封闭创面。异体皮移植又难以攻克免疫排斥反应这一难关。皮肤组织工程的出现和兴起，为解决这一难题提供了新的思路和方法。而组织工程中种子细胞的选择无疑是关键所在，来源于脂肪组织的人脂肪干细胞（adipose-derived stem cel，ADSCs），来源充足，容易获取，细胞贴壁能力强，体外易于培养;营养需求低，体外倍增时间短；且在脂肪组织中干细胞含量丰富， 可获得足够的细胞量以满足实验及临床应用的需要，因此成为皮肤组织工程的理想种子细胞。本项目中拟通过人羊膜细胞与人ADSCs共培养，诱导后者向表皮干细胞分化，同时进一步研究冻存复苏及长期传代后人ADSCs的成表皮干细胞分化能力，可望推动皮肤组织工程的进程。

为进一步为临床皮肤组织工程寻找理想的种子细胞，本项目以人脂肪来源的干细胞为研究对象，经传代培养及初步的鉴定，获得具有成脂、成骨多向分化潜能，并且流式检测表达CD44，CD29及CD105，但不表达CD45，表明所获细胞确为人脂肪干细胞（hADSCs）。通过人ADSCs与人羊膜细胞共培养14d后，获得上皮样细胞，且该细胞表达表皮干细胞特异性角蛋白CK19.已有研究表明，TP63在皮肤发生发育，尤其在表皮的发生中扮演分子开关的重要角色，因此本项目通过构建慢病毒载体，获得pLV.EX3d.P/neo-EF1A > TP63/flag>IRES/eGFP，同时用该病毒载体包装细胞，进而转染细胞，经Q-PCR和WESTERN-BLOT检测，建立了高表达TP63的人脂肪干细胞系，将该细胞应用于皮肤缺损大鼠，14天后发现皮肤基本愈合，HE染色显示缺损部位有连续的表皮形成，同时表皮分层明显，提示该细胞可望作为工具细胞用于皮肤及表皮发生的研究，并有望用于临床皮肤组织工程，以推动临床皮肤组织工程研究的进程。