DLBCL中miR-27b介导组蛋白去乙酰化酶调控MET信号通路的作用及其机制探讨

Histone deacetylase 6(HDAC6) is highly expressed in diffuse large B-cell lymphoma (DLBCL) and is associated with poor prognosis. However, the underlying mechanism remains unclear. Our previous study has shown that inhibition of HDAC6 could reduce the expression level of MET, however, miR-27b was significantly increased, indicating that miR-27b may be involved in the regulation of HDAC6. We will firstly observe the mRNA and protein expression of HDAC6, miR-27b and MET, as well as their clinicopathologic correlation in DLBCL tissues. In vitro, we will further investigate the regulation axis of HDAC6-miR-27b-MET and their effects on the biologic behavaior in DLBCL cells by using HDAC inhibitor, transfection, luciferase and ChIP assays. miR-27b and MET3'-UTR binding effect on the expression of MET will be confirmed. Finally, we will study the effects of inhition of HDAC6 and (or) MET on tumor growth in DLBCL-bearing mice and related molecules. Our study will clarify the role of miR-27b-mediated HDAC regulation of MET signaling pathway, and this will have important implications for the clinical application of corresponding inhibitors.

在弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）中组蛋白去乙酰化酶6（HDAC6）高表达并与预后差相关，但其机制尚不清楚。前期研究显示抑制HDAC6能下调MET表达，而miR-27b显著升高，提示其可能参与HDAC6对MET的调控。本课题将采用免疫组化、荧光定量PCR等技术观察DLBCL和淋巴结反应性增生中HDAC6、miR-27b和MET表达特征，分析其与临床病理、预后的相关性；进一步在体外DLBCL细胞株中通过抑制剂、转染、荧光素酶活性测定、ChIP等方法明确HDAC6-miR-27b-MET三者调控关系及其对细胞生物学行为的影响，证实miR-27b通过与MET3'-UTR结合影响MET的表达；最后通过小鼠移植瘤在体内观察HDAC6或(和)MET表达抑制对DLBCL肿瘤生长的影响。本研究将明确DLBCL中miR-27b介导的HDAC活化MET信号通路的作用，对相应抑制剂的临床应用具有重要意义。

弥漫大 B 细胞淋巴瘤是成人淋巴瘤中最常见的类型。尽管在治疗上取得了很大的进步，仍有大概 1/3 的晚期 DLBCL 患者对治疗抵抗或治疗后发生复发。探讨 DLBCL 的发病机制并寻找新的治疗靶点是 DLBCL 研究中提高DLBCL 治疗疗效的研究方向和热点。抑制 HDAC6 可能是有希望的治疗血液系统肿瘤的途径，并且既往研究显示 HDAC6 的特异性抑制剂 Ricolinostat （ACY -1215）可抑制 DLBCL 细胞的增殖。因此，有必要深入研究 HDAC6 在 DLBCL 发生发展中的作用及其抑制剂对 DLBCL 作用的分子机制。本研究首先利用 NanoString nCounter 技术测定并分析了 HDAC6 沉默表达的DLBCL 细胞中 microRNA 表达谱的改变，并筛选出 miR-27b 为表达水平增加最为显著的 microRNA，并可能与 DLBCL 的发生发展有关。我们进一步在 DLBCL组织中观察 miR-27b 的表达及其与患者临床病理特征及预后的关系，继而通过体内及体外实验对 miR-27b 在 DLBCL 中的生物学功能进行了进一步的研究。之后，我们探究并分析了 HDAC6 对 miR-27b 调控的机制，并通过综合靶基因预测及前期研究的结果阐释了 miR-27b 在 DLBCL 中发挥其功能的途径。本研究主要结论总结如下：1. 在 DLBCL 中 miR-27b 可能是介导 HDAC6 在 DLBCL 发生发展中发挥作用的关键 microRNA。2. miR-27b 在 DLBCL 中表达水平显著降低。3. 在 DLBCL 组织中 miR-27b 低表达与患者不良临床病理特征及不良预后有关。4. DLBCL 细胞中过表达 miR-27b 可抑制细胞增殖，促进细胞凋亡，抑制肿瘤生长。5. 抑制 HDAC6 可能通过促进 Rel A/p65 的乙酰化，抑制其核转位，减少其与miR-27b 启动子的结合，从而上调 miR-27b 的水平。6. MET 是 miR-27b 的靶基因，miR-27b 通过靶向 MET 并抑制 MET/PI3K/AKT途径发挥其抑癌作用。