Lipoxin对肝纤维化的影响及机制研究

新近发现炎症是一个从启动到缓解的程序化过程，且致炎因子是启动炎症缓解所必需的，抑制炎症发生的抗炎策略蕴藏着阻碍炎症缓解之隐患，因此，以往针对肝纤维化的抗炎、护肝、调控肝星状细胞的治疗策略显然不够全面。课题申请者在前期工作中发现机体内源性促炎症缓解介质脂氧素（Lipoxin）具有护肝和抗氧化作用的基础上，本课题拟采用四氯化碳建立大鼠肝纤维化模型，动态观察肝组织脂氧素及其受体的变化规律；从整体、离体、细胞和分子水平系统地研究脂氧素对肝纤维化的影响并确定其主要作用靶点；比较脂氧素与传统抗肝纤维化药物（水飞蓟素）作用的异同性，为肝纤维化治疗提供新思路和理论依据。

脂氧素（Lipoxins，LXs）是一类新发现的花生四烯酸代谢产物，具有强大的抗炎与促炎症消退双重作用，是体内重要的内源性促炎症消退介质，而且我们的前期研究工作提示LXs具备护肝效应。在本研究中我们利用CCl4建立实验性肝纤维化大鼠模型，观察LXs受体激动剂BML-111对肝纤维化的保护作用，并探讨其可能作用机制。.40只SD大鼠皮下注射CCl4建立大鼠实验性肝纤维化模型；肝组织HE染色观察肝组织损伤和炎症细胞浸润程度；血清AST和ALT活性检测反映肝功能水平；肝脏大体观、肝组织切片VG染色和Masson染色、肝组织Hyp（Hydroxyproline）含量综合评定肝纤维化程度；免疫组化和Western-blot法检测肝脏组织α-SAM表达水平以反应肝星状细胞活化程度；促纤维化细胞因子TGF-β1及PDGF的表达水平通过ELISA和Western-blot法测定；Western-blot法检测肝组织中MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9 及 TIMP-1 的表达水平；肝组织中MDA含量，SOD、GSH-Px、CAT的活性及总抗氧化能力T-AOC分别利用生化试剂盒进行检测；免疫荧光法检测NF-κB P65的转位水平。结果显示：BML-111能够抑制大鼠肝脏损伤、炎症细胞浸润和肝功能损害；减轻大鼠的肝纤维化程度；抑制肝星状细胞活化；抑制大鼠肝组织表达TGF-β1和PDGF；降低MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-9 和 TIMP-1的表达水平；减少MDA含量，但增但增加SOD、GSH-Px、CAT抗氧化酶的活性以及肝组织总抗氧化能力T-AOC；抑制大鼠NF-κB P65核转位。由此可见，BML-111具有抑制CCl4诱导的大鼠实验性肝纤维化效应，其作用机制可能包括减少促纤维化细胞因子TGF-β1和PDGF的表达、抑制HSC活化而减少ECM合成、增强大鼠肝组织抗氧化能力、恢复MMPs/TIMPs平衡而调节ECM异常代谢、阻碍转录因子NF-κB P65核转位。